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谷胱甘肽纳米脂质体的研制

2020-12-07阅读(983)

谷胱甘肽纳米脂质体的研制

论文摘要

谷胱甘肽（GSH）是一种生物活性三肽,在生物体内具有多种重要的生理功能,在食品工业、临床医药及有关生物研究领域都有着广泛的用途。但GSH易氧化,货架期短,不易透过细胞膜,这些因素限制了它的应用。因此,本论文对GSH的纳米脂质体和前体脂质体的制备进行了研究,旨在提高谷胱甘肽的稳定性、保持其功效。本论文首先探讨了制备GSH纳米脂质体的可行性。研究结果显示,GSH在酸性的正辛醇/水的体系中分配系数均远远小于-0.3,水溶性好;脂质体膜材（卵磷脂、胆固醇和吐温80）以及制备工艺过程（旋转蒸发、pH的调节和超声乳化）对GSH的稳定性影响较小,不会引起GSH失活。因此,脂质体可以用来包埋谷胱甘肽。本研究采用凝胶过滤法来分离脂质体和游离的GSH,以0.05 mol/L PBS（0.5 mol/L NaCl）为洗脱剂,不同浓度的GSH溶液经凝胶柱分离后平均回收率可达94.0%。选择了pH梯度法、反相蒸发法、乙醇注入法和乙醚注入法来制备GSH脂质体,以包封率、粒径、多分散性指数（PDI）以及贮藏稳定性为指标,对这四种方法进行了比较。综合考虑,确定采用pH梯度法制备GSH脂质体。pH梯度法制备GSH纳米脂质体的最佳工艺条件和配方为:GSH载量为25%（W/W）,胆固醇/卵磷脂（W/W）为0.25/1,吐温80/卵磷脂（W/W）为0.5/1,乙醚/柠檬酸缓冲液（V/V）为3/1,pH梯度范围为pH3-6,水合温度为40℃,水合时间为30min,超声强度为200W,超声时间为5min。制备得到的GSH脂质体的包封率为90.3%,平均粒径为102.1nm,PDI为0.031,微观形态良好,囊泡分散均匀。然后考察了GSH脂质体在不同贮藏条件下的物理化学稳定性。结果表明,温度对脂质体的稳定性影响很大,4℃条件下贮藏的脂质体的稳定性较好。对制备GSH前体脂质体所用的冻干保护剂进行了筛选,结果表明,在七种保护剂中,甘露醇的保护效果最好。甘露醇与磷脂质量比为15:1时,制得的GSH前体脂质体颜色均匀,结构致密,形态饱满,复水后包封率为85.4%,保留率达到了88.1%,粒径为469.9nm。FTIR红外光谱分析显示甘露醇对脂质体膜的完整性起到了保护作用。GSH前体脂质体经20℃和40℃下储藏30天后,粒径、包封率、pH值、丙二醛含量（MDA）等均未发生显著的变化,储藏稳定性较好,说明了将脂质体制备成前体脂质体提高了脂质体的稳定性。吸湿平衡试验结果表明,较低湿度对GSH前体脂质体的稳定性影响很小,脂质体稳定;高湿环境对前体脂质体的稳定性影响较大。因此,脂质体冻干粉应储藏于干燥或低湿的环境中。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 谷胱甘肽
  • 1.1.1 谷胱甘肽的性质及分布
  • 1.1.2 谷胱甘肽的生理功能及应用前景
  • 1.2 脂质体
  • 1.2.1 概述
  • 1.2.2 脂质体的特点
  • 1.2.3 脂质体的制备方法
  • 1.2.4 脂质体的应用
  • 1.3 立题意义及研究的主要内容
  • 第二章 谷胱甘肽纳米脂质体的制备方法的研究
  • 2.1 前言
  • 2.2 材料与设备
  • 2.2.1 试验材料与主要试剂
  • 2.2.2 主要设备
  • 2.3 试验方法
  • 2.3.1 谷胱甘肽的正辛醇/水分配系数的测定
  • 2.3.2 谷胱甘肽纳米脂质体的制备方法
  • 2.3.3 脂质体包封率的测定方法
  • 2.3.4 脂质体的分离方法
  • 2.3.5 脂质体平均粒径和粒度分布
  • 2.4 结果与讨论
  • 2.4.1 谷胱甘肽纳米脂质体制备的可行性分析
  • 2.4.2 脂质体与游离GSH 的分离
  • 2.4.3 脂质体制备方法的比较
  • 2.5 本章小结
  • 第三章 pH梯度法制备谷胱甘肽纳米脂质体的研究
  • 3.1 前言
  • 3.2 材料与设备
  • 3.2.1 试验材料与主要试剂
  • 3.2.2 主要设备
  • 3.3 试验方法
  • 3.3.1 GSH 脂质体的制备
  • 3.3.2 GSH 脂质体包封率的测定
  • 3.3.3 GSH 的测定
  • 3.3.4 GSH 脂质体平均粒径和粒径分布的测定
  • 3.3.5 丙二醛（MDA）含量的测定
  • 3.3.6 纳米脂质体表观形貌的观察
  • 3.3.7 氧化指数（OI）的测定
  • 3.4 结果与讨论
  • 3.4.1 pH 梯度法制备GSH 脂质体的工艺和配方的单因素试验
  • 3.4.2 GSH 纳米脂质体的物理化学稳定性
  • 3.5 本章小结
  • 第四章 谷胱甘肽纳米脂质体冻干粉的研制
  • 4.1 前言
  • 4.2 材料与设备
  • 4.2.1 试验材料与主要试剂
  • 4.2.2 主要设备
  • 4.3 试验方法
  • 4.3.1 GSH 脂质体的制备
  • 4.3.2 GSH 脂质体包封率的测定
  • 4.3.3 GSH 的测定
  • 4.3.4 GSH 脂质体平均粒径和粒径分布的测定
  • 4.3.5 丙二醛（MDA）含量的测定
  • 4.3.6 前体脂质体的制备
  • 4.3.7 前体脂质体的重建水合
  • 4.3.8 前体脂质体FTIR 分析
  • 4.3.9 前体脂质体吸湿性的测定
  • 4.4 结果与讨论
  • 4.4.1 冻干保护剂的选择
  • 4.4.2 GSH 前体脂质体外观形态评价
  • 4.4.3 冻干保护剂对前体脂质体复水后包封率的影响
  • 4.4.4 冻干保护剂对前体脂质体复水后粒径分布的影响
  • 4.4.5 GSH 前体脂质体的FTIR 分析
  • 4.4.6 GSH 前体脂质体的贮藏稳定性
  • 4.5 本章小结
  • 主要结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读硕士学位期间发表的论文清单

    • 相关论文文献

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