沙丘芦苇特有内含物PAAC与蛋白质的相互作用

论文摘要

蛋白质是重要的生命物质，它与营养、发育、遗传、新陈代谢等生命活动有着密切的联系。许多小分子都能和蛋白质分子发生相互作用。利用小分子与蛋白质之间的相互作用可了解和揭示生物大分子的结构和功能及其变化、小分子与生物大分子之间的作用过程，同时针对与大分子的作用或吸附等，研究其与大分子逆境稳定性的关系，具有重要的理论价值和潜在的实用价值。本实验以PAAC为偶联配基制成亲和柱，在固定化的条件下研究其与不含PAAC的水生芦苇叶片可溶性蛋白的结合特性。主要内容如下：采用沙丘生态型芦苇（phragmites communis Trin．）叶片为材料提纯PAAC（polyamine aromatic compound），以生长在水份状况比较良好的水生生态型芦苇叶片作为实验材料。使用亲和层析方法研究沙丘芦苇中特有的小分子物质PAAC与水生芦苇叶片可溶性蛋白之间的相互作用。因为PAAC为多氨基小分子，故可以与溴化氰活化的固相介质琼脂糖凝胶结合，得到以PAAC为偶联配基的固定化载体。水生芦苇叶片可溶性蛋白中可与PAAC结合的蛋白可被吸附在亲和柱上，然后以各种洗脱条件，把被吸附蛋白洗脱下来。根据不同的洗脱条件，分析PAAC与水生芦苇叶片可溶性蛋白之间的相互作用、两者之间相互作用力的类型及强弱。结果发现两者间的相互作用以盐键为主，氢键为辅，并且针对蛋白质的种类特异性不明显。本实验使用荧光光谱法和圆二色谱法等光谱学方法证明了PAAC与蛋白质之间存在着相互结合作用及可能存在的变构效应。实验证明了PAAC对蛋白质的荧光猝灭作用是生成PAAC-蛋白质复合物的静态猝灭，计算了PAAC与蛋白质的结合常数及结合位点数，证明了二者间具有一定的结合作用。为进一步阐明PAAC对蛋白质的保护作用提供了有利条件。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 第一章 文献综述及前言
• 1.1 芦苇及其四种生态型
• 1.2 四种生态型芦苇抗逆生理的研究
• 1.3 小分子与蛋白质相互作用的分析方法
• 1.4 小分子与蛋白质的相互作用位点
• 1.5 小分子与蛋白质的相互作用力类型
• 1.6 小分子与蛋白质的结合方式与结合部位
• 1.7 亲和层析技术在蛋白质研究中的应用
• 1.8 本实验的研究目的、意义
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 亲和柱的制备
• 2.3 样品的制备
• 2.4 SDS-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）
• 2.5 荧光光谱法
• 2.6 圆二色谱法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 PAAC与水生芦苇叶片不同可溶性蛋白的吸附
• 3.2 不同离子强度对PAAC与蛋白质结合的影响
• 3.3 不同pH对PAAC与蛋白质结合的影响
• 3.4 PAAC作用下不同蛋白质的荧光光谱及其强度变化
• 3.5 PAAC作用下蛋白质的CD光谱及变化
• 第四章 讨论
• 一. PAAC与水生芦苇叶片可溶性蛋白之间的相互作用分析
• 二. PAAC对蛋白质内源荧光的猝灭作用
• 三. PAAC作用下蛋白质CD光谱的变化
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢