血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患性寄生虫病。现有的研究表明,东方田鼠具有抗日本血吸虫感染的天然抗性,且这种抗性能稳定遗传。东方田鼠在其长期进化过程中形成了复杂的免疫机制,已有的研究结果显示,东方田鼠存在抗日本血吸虫抗性相关基因。在前期研究中,课题组利用表达克隆法从东方田鼠骨髓cDNA文库中分离得到了一个能显著杀伤日本血吸虫童虫的单个基因E77.43生物学信息分析表明,E77.43为整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,命名为Mf--ILKAP。本实验应用生物信息学方法对东方田鼠ILKAP基因进行分析；通过real-time PCR及Western blot等分子生物学技术分别从mRNA水平和蛋白质水平分析ILKAP基因在小鼠和东方田鼠不同组织间的表达水平。结果表明：东方田鼠ILKAP基因与小鼠ILKAP基因在蛋白质序列上有较高相似性,系统进化树显示Mf-ILKAP与褐家鼠、小鼠的遗传距离较小,亲缘关系较近；预测得到的蛋白质三维结构显示,东方田鼠ILKAP与小鼠ILKAP蛋白在羧基端存在差异；东方田鼠ILKAP与小鼠ILKAP基因在组织表达水平上存在很大差异。我们建立了pLXSN-ILKAP重组逆转录病毒载体介导的基因导入系统,构建pLXSN-ILKAP逆转录病毒载体,将该载体转染进病毒包装细胞PA317中,收集细胞培养上清,高速离心浓缩并纯化病毒,使用生物学方法测定病毒滴度,用于后续基因治疗日本血吸虫感染小鼠实验。
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