ILKAP基因在东方田鼠体内表达分析及重组逆转录病毒载体构建和病毒制备

论文摘要

血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患性寄生虫病。现有的研究表明,东方田鼠具有抗日本血吸虫感染的天然抗性,且这种抗性能稳定遗传。东方田鼠在其长期进化过程中形成了复杂的免疫机制,已有的研究结果显示,东方田鼠存在抗日本血吸虫抗性相关基因。在前期研究中,课题组利用表达克隆法从东方田鼠骨髓cDNA文库中分离得到了一个能显著杀伤日本血吸虫童虫的单个基因E77.43生物学信息分析表明,E77.43为整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,命名为Mf--ILKAP。本实验应用生物信息学方法对东方田鼠ILKAP基因进行分析；通过real-time PCR及Western blot等分子生物学技术分别从mRNA水平和蛋白质水平分析ILKAP基因在小鼠和东方田鼠不同组织间的表达水平。结果表明：东方田鼠ILKAP基因与小鼠ILKAP基因在蛋白质序列上有较高相似性,系统进化树显示Mf-ILKAP与褐家鼠、小鼠的遗传距离较小,亲缘关系较近；预测得到的蛋白质三维结构显示,东方田鼠ILKAP与小鼠ILKAP蛋白在羧基端存在差异；东方田鼠ILKAP与小鼠ILKAP基因在组织表达水平上存在很大差异。我们建立了pLXSN-ILKAP重组逆转录病毒载体介导的基因导入系统,构建pLXSN-ILKAP逆转录病毒载体,将该载体转染进病毒包装细胞PA317中,收集细胞培养上清,高速离心浓缩并纯化病毒,使用生物学方法测定病毒滴度,用于后续基因治疗日本血吸虫感染小鼠实验。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词简表
• 前言
• 技术路线
• 第一章 ILKAP基因生物信息学分析及其在东方田鼠体内表达分析
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 第二章 pLXSN-ILKAP重组逆转录病毒的包装、浓缩和滴度测定
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果