论文摘要
目的:探讨组蛋白去乙酰基酶（histone deacetylases,HDACs）抑制剂丙戊酸钠和HDAC-1 siRNA在宫颈癌细胞增殖,周期分布和凋亡中的作用;研究丙戊酸钠和HDAC-1 siRNA对宫颈癌细胞放射敏感性的影响。方法:体外培养人宫颈癌Hela和Siha细胞。实验分为6组,Hela细胞对照组,Hela细胞丙戊酸钠组,Siha细胞对照组,Siha细胞丙戊酸钠组,Hela细胞siRNA对照序列转染组,Hela细胞HDAC-1 siRNA转染组。设计3条HDAC-1 siRNA序列,体外转染Hela细胞,western blot检测蛋白沉默效果,选取沉默效果最佳的HDAC-1 siRNA序列。MTT法检测各不同处理组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布和凋亡率变化;Western blot检测HDAC-1、p21WAF1/ CIP1、磷酸化CDK2（p-CDK2）、cyclinE、Ku70、Ku80蛋白的表达;RT-PCR检测p21WAF1/ CIP1mRNA的表达;适当浓度丙戊酸钠处理或HDAC-1 siRNA转染48h后,细胞克隆集落形成法检测丙戊酸钠和HDAC-1 siRNA的放射增敏效果;应用单击多靶模型拟合细胞存活曲计算不同处理组D0、SF2和放射增敏比（sensitizing enhancement ratio,SER）。结果:⑴丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制Hela和Siha细胞生长;⑵丙戊酸钠可显著影响人宫颈癌Hela和Siha细胞的周期分布,引起G0/G1期阻滞;⑶丙戊酸钠上调Hela和Siha细胞p21WAF1/ CIP1蛋白和mRNA表达,下调p-CDK2蛋白水平,上调Hela细胞cyclinE蛋白表达,下调Siha细胞cyclinE蛋白表达;⑷3条HDAC-1 siRNA序列转染均可不同程度下调Hela细胞HDAC-1蛋白表达,HDAC-1 siRNA 001序列转染后48h达到最高沉默效率（80%）;⑸HDAC-1 siRNA转染抑制Hela细胞生长;⑹HDAC-1 siRNA转染诱导Hela细胞凋亡;⑺HDAC-1 siRNA转染上调Hela细胞p21WAF1/ CIP1和cyclinE蛋白表达,下调p-CDK2蛋白水平;⑻Hela和Siha细胞中,丙戊酸钠照射组D0和SF2明显低于单纯照射组,SER分别为1.1286和2.1547;⑼丙戊酸钠下调射线照射前后Siha细胞Ku80蛋白表达和射线照射后Hela细胞Ku80蛋白;⑽在受射线照射的Siha细胞中,出现明显的G2/M期堆积,S期上调,G0/G1期下调;丙戊酸钠明显降低射线照射引起的G2/M期堆积,下调S期比例,诱导G0/G1期阻滞;⑾HDAC-1 siRNA没有显著改变Hela细胞D0和SF2值,对Hela细胞没有放射增敏作用;⑿HDAC-1 siRNA不影1+6,响Hela细胞Ku70、Ku80蛋白表达。结论:⑴丙戊酸钠可能通过上调p21WAF1/ CIP1蛋白表达,抑制CDK2磷酸化,阻碍G1/S期转化,诱导G0/G1期阻滞实现抗增殖作用。⑵HDAC-1 siRNA可有效沉默HDAC-1蛋白,HDAC-1 siRNA可能通过诱导细胞凋亡抑制Hela细胞生长。⑶丙戊酸钠可能通过下调DNA修复蛋白Ku80表达,诱导G0/G1期阻滞和抵消放疗引起的G2/M期阻滞对人宫颈癌细胞起放射增敏作用;⑷HDAC-1 siRNA对Hela细胞没有放射增敏作用。