绿茶和茶多酚在肉鸡体内代谢及对血浆蛋白质的影响

论文摘要

本试验选择108只40日龄肉鸡为研究对象，按笼养饲养的方式进行，饲喂500mg/kg绿茶（greentea，GT）、300mg/kg茶多酚（teapolyphenols，TP）、300mg/kg表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechingallate，EGCG]。利用高效液相色谱（high-performanceliquidchromatography，HPLC）、液质联用（liquidchromato-graphyintandemmassspectrometry，LC-MS/MS）和凝胶电泳等方法，分析茶多酚及其代谢产物在鸡血和鸡粪中的变化，及茶多酚对鸡血浆蛋白质的影响。经分析，结果如下：1.经比色法和HPLC方法分析，绿茶粉中总茶多酚的含量为19.17%，其中含2.22mg/g没食子酸（gallicacid，GA）、4.76mg/g没食子儿茶素[（-）-gallocatechin，GC]、22.63mg/g表没食子儿茶素[（-）-epigallocatechin，EGC]、17.43mg/g儿茶素[（+）-catechin，C]、5.53mg/g表儿茶素[（-）-epicatechin，EC]、53.52mg/gEGCG、76mg/g没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-gallocatechingallate，GCG],18.41mg/g表儿茶素没食子酸酯[（-）-epicatechingallate，ECG]。2.通过LC-MS/MS分析，在血浆中，灌喂绿茶组共鉴定出：焦性没食子酸（Pyrogallolacid，PA）、GC、（-）-5-（3’,4’-二羟基苯基）-γ-戊内酯[（-）-5-（3’,4’-dihydroxyphenyl）-γ-valerolactone，M6]、C、GCG、O-methyl-gallocatechin-O-glucuronides（O-Me-GC-O-GlcUA）、Epicatechin-glucuronides+H+（EC-GlcUA+H+）等7种产物；灌喂TP组共鉴定出：PA、GC、M6、C、EGCG、O-Me-GC-O-GlcUA、EC-GlcUA+H+等7种产物；灌喂EGCG组共鉴定出：EGCG、GCG、O-Me-GC-O-GlcUA等3种产物。在鸡粪中，灌喂绿茶组共鉴定出：GA、O-methyl-catechin-O-sulphates（O-Me-C-O-S）、O-methyl-gallocatechin-O-sulphates（O-Me-GC-O-S）、EGCG、GCG、ECG、O-Mel-GC-O-GlcUA、EC-GlcUA+H+等8种产物；灌喂TP组共鉴定出：GA、O-Me-C-O-S、O-Me-GC-O-S、EGCG、GCG、ECG等6种产物；灌喂EGCG组共鉴定出：O-Me-C-O-S、EGCG、GCG、ECG等4种产物。鸡血中主要是甲基化和葡萄糖酸化衍生物，而鸡粪中既有甲基化、葡萄糖酸化又有硫酸化衍生物。3.经HPLC分析。在鸡血中，灌喂绿茶组游离儿茶素GC、C给药4h时在血中最高浓度分别达到20.21μmol/L、76.99μmol/L，而游离儿茶素EGCG在给药8h时最高浓度达到34.28μmol/L；灌喂TP组游离儿茶素GC、C给药4h时血中最高浓度分别40.35μmol/L、17.25μmol/L，游离儿茶素EGCG在给药4～8时，在血浆中已代谢完；灌喂EGCG组，在给药0～1.5h之间，游离儿茶素EGCG在血浆中分解成GCG，而在4～8h之间在血浆中已代谢完。灌喂GT组衍生物O-Me-GC-O-GlcUA、EC-GlcUA+H+在给药4h时在血液中最高浓度分别为1.13μmol/L、1.95μmol/L；灌喂TP组衍生物O-Me-GC-O-GlcUA、EC-GlcUA+H+在给药4h时最高浓度分别达到1.71μmol/L、1.08μmol/L。对灌喂EGCG组，O-Me-GC-O-GlcUA在给药4h浓度最大。灌喂GT组裂解物PA在给药4h时在血中的浓度达到最大，M6在给药8h时浓度达到最大。灌喂TP组PA在给药4h时在血液中浓度达到最大，M6在给药01.5h时未检出。灌喂EGCG组08h试验期间未检测到裂解物。4.鸡粪经HPLC分析。GA、EGCG、GCG、ECG在灌喂绿茶组和茶多酚组等4种游离儿茶素都在4h时排泄量最大；灌喂EGCG组游离儿茶素EGCG、ECG在给药4时排泄量最大。GT组粪样中衍生物O-Me-GC-O-S给药4h排泄量最大，O-Me-C-O-S、O-Me-GC-O-GlcUA给药1.54时内全部排泄，EC-GlcUA+H+在给药48h内排泄完；TP组粪样中衍生物O-Me-GC-O-S在给药4h排泄量最大；EGCG组粪样中在给药08h之间仅检测到1种儿茶素代谢物：O-Me-C-O-S,且在给药4h时排泄量最大。5.绿茶和茶多酚在1.5h内均可以提高鸡血血浆总蛋白含量，其中以TP的作用最为明显。当饲喂后，时间超过4h，与对照组相比，GT组血浆总蛋白含量减少，TP组和EGCG组血浆蛋白含量显著提高。给药4-8h内，与对照组相比，GT组和EGCG组血浆总蛋白含量显著降低，茶多酚对血浆总蛋白含量显著提高。6.灌喂1.5h后，TP可使分子量为67.5kd的蛋白带加深，而EGCG导致分子量为107.1kd蛋白带消失；灌喂4h后，GT可使分子量为58.9kd的蛋白带明显加深，EGCG导致该蛋白带的消失；灌喂8h后，各组血浆中蛋白组分含量的变化均不明显。灌喂绿茶和茶多酚，时间在4h之内，对血浆蛋白各组分含量造成影响较明显。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 绿茶及茶多酚概述
• 1.2 茶多酚的生物学活性
• 1.3 茶多酚在动物体内代谢途径的研究
• 1.3.1 四种主要儿茶素的代谢途径[ 26 ]
• 1.3.2 儿茶素在体内代谢过的程特点
• 1.4 血液和组织中游离儿茶素及其代谢物的提取方法
• 1.4.1 液 - 液萃取法
• 1.4.2 固相萃取法
• 1.5 血液和组织中游离儿茶素及其代谢物含量的检测方法
• 2 引言
• 2.1 课题研究的意义
• 2.2 研究内容
• 3 材料与方法
• 3.1 材料、仪器和试剂
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 酒石酸铁比色法测定绿茶中茶多酚含量
• 3.2.2 绿茶中 8 种儿茶素的测定
• 3.2.3 灌胃实验设计
• 3.2.4 鸡血浆和粪便中绿茶茶多酚的代谢物鉴定
• 3.2.5 鸡血浆中茶多酚代谢物浓度的测定
• 3.2.6 粪便中游离儿茶素及其代谢物的分析
• 3.2.7 绿茶和茶多酚对鸡血浆蛋白的影响
• 4 结果与分析
• 4.1 茶多酚分析
• 4.2 血浆中茶多酚回收率的测定
• 4.3 血浆和粪便中绿茶茶多酚代谢物的鉴定
• 4.4 血浆中绿茶茶多酚代谢产物含量的变化
• 4.4.1 灌喂 1.5h 后血浆中代谢产物含量的测定
• 4.4.2 灌喂 4h 后血浆代谢产物含量的测定
• 4.4.3 灌喂 8h 后血浆中代谢产物含量的测定
• 4.5 粪便中绿茶茶多酚代谢产物含量的变化
• 4.5.1 灌喂 1.5h 后粪中代谢产物含量的测定
• 4.5.2 灌喂 4h 后粪中代谢产物含量的测定
• 4.5.3 灌喂 8h 后粪中代谢产物含量的测定
• 4.6 绿茶和茶多酚对血浆蛋白的影响
• 4.6.1 血浆总蛋白的变化
• 4.6.2 不同时段血浆蛋白组分的变化
• 5 讨论
• 5.1 鸡血浆中绿茶儿茶素及其代谢物提取技术
• 5.2 血浆和粪样中儿茶素衍生物的分析
• 5.3 茶多酚在血浆代谢产物的测定
• 5.4 绿茶和茶多酚对鸡血浆总蛋白量的影响
• 5.5 绿茶和茶多酚对血浆蛋白组分的影响
• 6 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简历
• 研究生期间发表的论文