圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

论文摘要

目的：如何对抗放化疗所致的骨髓抑制,是肿瘤放化治疗成功的关键。寻找一些有效且副反应少的药物来缓解骨髓抑制也是众多医务工作者一直努力的方向。本研究拟选用经典的补气益血名方圣愈汤,采用现代血液学、细胞生物学技术和方法,观察其对骨髓抑制小鼠造血的调控作用及其可能的作用机理,并将其配方颗粒与传统煎剂作对比研究,为临床应用该方提供实验室依据。方法：采用60钴（60Co）γ射线照射和注射环磷酰胺、氯霉素复合的方法制备骨髓抑制小鼠模型,使用血细胞计数、祖细胞集落分析方法观察圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠的外周血细胞数、各系祖细胞集落产率的影响；使用石蜡切片技术观察圣愈汤对模型小鼠骨髓和脾脏组织形态结构的影响；使用流式细胞术、免疫组织化学法观察圣愈汤对模型小鼠骨髓细胞增殖周期、凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响；使用半定量逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）法观察圣愈汤对模型小鼠部分重要的造血生长因子mRNA和血清中浓度的影响；使用基质细胞培养技术、免疫组织化学术观察圣愈汤对模型小鼠造血微环境的影响。从造血干/祖细胞、造血生长因子、造血微环境等多方面,系统地、多层次地研究圣愈汤对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用及其可能机制,并比较其配方颗粒和传统煎剂的作用有何差异。结果：本研究发现：1、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可提高骨髓抑制小鼠外周血WBC、RBC、Hb、PLT数量、骨髓有核细胞数。2、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可有效提高骨髓抑制小鼠粒系、红系和巨核系体外造血祖细胞培养集落产率。3、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可改善骨髓抑制小鼠骨髓和脾脏组织形态学结构,增加骨髓造血组织面积和巨核细胞数。4、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可促使骨髓抑制小鼠骨髓细胞G0/G1期细胞向S期转化,S期细胞向G2/M期转化,促进骨髓细胞增殖。5、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可通过上调Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,而减少骨髓抑制小鼠的骨髓有核细胞凋亡6、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可上调骨髓抑制小鼠肾脏EPOmRNA、脾脏TPOmRNA、骨髓细胞EPO和GM-CSFmRNA的表达,增加血清EPO、TPO和GM-CSF的含量。7、圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可增强骨髓抑制小鼠骨髓基质细胞增殖和其粘附力,并促进骨髓基质中FN、LN的表达,以改善造血微环境。8、圣愈汤配方颗粒与传统煎剂对骨髓抑制小鼠造血功能的重建和作用机理相似,两者比较无明显差异。结论：本研究显示圣愈汤传统煎剂和配方颗粒均可明显促进骨髓抑制小鼠造血功能的恢复。其机制可能是：通过调控骨髓细胞的细胞周期,促进骨髓细胞的增殖；抑制骨髓细胞的凋亡；改善骨髓造血微环境、促进造血生长因子的表达进而改善骨髓三系血细胞的造血；改善脾脏组织形态结构,而促进脾脏造血。圣愈汤配方颗粒与传统煎剂在改善骨髓抑制小鼠造血功能的重建和作用机理相似,二者间无明显差异。

论文目录

• 前言
• 摘要
• Abstract
• 目录
• 缩略词表
• 第一部分 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数和造血祖细胞集落产率影响的实验研究
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 试剂和耗材
• 1.4 实验主要仪器和设备
• 1.5 方法
• 1.6 检测指标
• 1.7 统计学方法
• 2 实验结果
• 2.1 小鼠一般状况
• 2.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数（BMNCs）的影响
• 2.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠体外培养造血祖细胞集落数的影响
• 3 讨论
• 3.1 西方医学和中国传统医学对放、化疗后骨髓抑制的认识
• 3.2 骨髓抑制小鼠模型的选择和评价
• 3.3 圣愈汤对骨髓抑制小鼠外周血细胞数、体外培养祖细胞集落产率的影响
• 小结
• 第二部分 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓、脾脏组织病理学影响的实验研究
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 试剂和耗材
• 1.4 实验主要仪器和设备
• 1.5 方法
• 1.6 检测指标
• 1.7 统计学方法
• 2.实验结果
• 2.1 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓组织结构的影响
• 2.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓造血组织面积和巨核细胞数的影响
• 2.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠脾脏指数的影响
• 2.4 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠脾脏组织结构的影响
• 3.讨论
• 小结
• 第三部分 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期、凋亡相关蛋白表达影响的实验研究
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 试剂和耗材
• 1.4 实验主要仪器和设备
• 1.5 方法
• 1.6 检测指标
• 1.7 统计学方法
• 2.实验结果
• 2.1 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期的影响
• 2.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓有核细胞凋亡率的影响
• 2.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对小鼠股骨bc1-2和bax表达的影响
• 3.讨论
• 小结
• 第四部分 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑小鼠造血生长因子EPO、TPO、GM-CSF影响的实验研究
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 试剂和耗材
• 1.4 实验主要仪器和设备
• 1.5 方法
• 1.6 检测指标
• 1.7 统计学方法
• 2.实验结果
• 2.1 EPO、GM-CSF、TPO的标准曲线
• 2.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠血清EPO、TPO、GM-CSF含量的影响
• 2.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞、肾脏、脾脏EPOmRNA、TPOmRNA和GM-CSFmRNA基因表达的影响
• 3 讨论
• 3.1 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠EPO的影响
• 3.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠TPO的影响
• 3.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠GM-CSF的影响
• 小结
• 第五部分 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血微环境影响的实验研究
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 试剂和耗材
• 1.4 主要设备和仪器
• 1.5 方法
• 1.6 检测指标
• 1.7 统计学方法
• 2 实验结果
• 2.1 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒体内用药对骨髓基质细胞体外培养形态学观察
• 2.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠体外培养骨髓基质细胞生长情况的影响
• 2.3 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠BMSCs贴壁层对正常小鼠骨髓有核细胞粘附力的影响
• 2.4 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠股骨FN和LN的表达
• 3 讨论
• 3.1 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓基质细胞的影响
• 3.2 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对造血微环境细胞外基质（ECM）的影响
• 小结
• 结论
• 创新点
• 圣愈汤传统煎剂和配方颗粒作用机制示意图
• 问题与展望
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间发表的论文、论著及科研项目
• 附录
• 1 附图
• 1.1 体外半固体培养体系中的骨髓造血祖细胞集落
• 1.2 各组小鼠股骨骨髓组织石蜡切片
• 1.3 各组小鼠脾脏组织石蜡切片
• 1.4 各组小鼠骨髓细胞抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达
• 1.5 各组小鼠骨髓细胞促进凋亡蛋白Bax的表达
• 1.6 各组小鼠造血生长因子EPO、TPO、GM-CSF mRNA的表达
• 1.7 骨髓基质细胞培养各组小鼠基质细胞生长情况
• 1.8 各组小鼠股骨骨髓细胞外基质FN的表达
• 1.9 各组小鼠股骨骨髓细胞外基质LN的表达
• 2 文献综述一
• 参考文献
• 3 文献综述二
• 参考文献