富含谷胱甘肽面包酵母菌株的选育

论文摘要

本论文对谷胱甘肽的提取方法进行了比较和优化,通过复合诱变育种筛选到了富含谷胱甘肽的酵母菌株、并进一步对发酵培养基和发酵条件进行了优化。通过对谷胱甘肽测定方法的重现性试验,证明此方法重现性好,准确度高,是测定酵母中谷胱甘肽合适的测定方法。对两种谷胱甘肽提取方法的比较表明:热水抽提法更适合提取酵母胞内谷胱甘肽。进一步对热水抽提法的提取条件进行了优化,优化后的条件为:温度90～95℃,时间8min,pH自然,提取液量40mL。对15株酵母菌的菌体干重及谷胱甘肽产量、含量进行了比较,确定了面包酵母BY-14作为诱变出发菌株。对该菌株进行紫外诱变,以ZnCl2为筛子进行筛选,获得了一株诱变效果较好的菌株B-3,谷胱甘肽产量达到78.23 mg/L,比出发菌株提高了12%;谷胱甘肽含量达到14.82mg/g,比出发菌株提高了11%。采用均匀分析法优化了突变株B-3的发酵培养基。在此基础上,优化了摇瓶分批发酵条件。与初始条件相比,在优化条件下菌株B-3发酵生产谷胱甘肽的产量为96.72mg/L,比优化前提高了23.63%,谷胱甘肽含量为18.96mg/g,比优化前提高了28%。以提高突变株B-3的谷胱甘肽产量为目的,采用低能氮离子注入技术,以乙硫氨酸抗性筛选法进行了诱变选育研究。获得了一株具有乙硫氨酸抗性的突变株BL-23,该菌株谷胱甘肽产量比出发菌株提高了17.3%,达到113.46 mg/L;谷胱甘肽含量达到20.86mg/g,比出发菌株提高了10%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 食用酵母概述
• 1.1.1 酵母的营养意义
• 1.1.2 食品酵母概念及产品种类
• 1.1.3 食用酵母的营养价值
• 1.1.4 国内外生产与研究概况
• 1.2 谷胱甘肽概述
• 1.2.1 谷胱甘肽的生理功能与营养价值
• 1.2.2 谷胱甘肽在酵母体内的代谢途径
• 1.2.3 谷胱甘肽的应用
• 1.2.4 谷胱甘肽的测定方法
• 1.3 富含谷胱甘肽面包酵母菌株的选育
• 1.3.1 面包酵母的种类
• 1.3.2 面包酵母的工业生产
• 1.3.3 富含谷胱甘肽酵母菌株的选育
• 1.4 本论文的立题依据与研究内容
• 1.4.1 立题依据
• 1.4.2 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 主要试验材料
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 培养基
• 2.2 分析方法
• 2.2.1 细胞生物量的测定
• 2.2.2 胞内谷胱甘肽含量的测定
• 2.2.3 pH值的测定
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 培养方法
• 2.3.2 谷胱甘肽的提取
• 2.3.3 生长曲线的绘制
• 2.3.4 紫外诱变育种及筛选方法
• 2.3.5 离子注入诱变育种及筛选方法
• 2.3.6 金属离子的影响——均匀设计
• 3 结果与讨论
• 3.1 谷胱甘肽测定方法的验证
• 3.1.1 样品含量的测定
• 3.1.2 谷胱甘肽提取方法的确定
• 3.1.3 热水提取条件的优化
• 3.2 出发菌株的确定
• 3.3 富含谷胱甘肽酵母菌株的紫外诱变选育
• 3.3.1 面包酵母菌株的生长曲线
• 3.3.2 紫外线照射剂量的选择
• 3.3.3 初筛平板药物浓度的确定
• 3.3.4 抗氯化锌菌株的筛选
• 3.4 突变株发酵条件的研究
• 3.4.1 培养基成分的优化
• 3.4.2 培养条件的优化
• 3.4.3 优化条件下谷胱甘肽含量产量的测定
• 3.5 离子注入诱变选育富含谷胱甘肽酵母菌株
• +）注入对B-3菌株存活率的影响'>3.5.1 氮离子（N⁺）注入对B-3菌株存活率的影响
• 3.5.2 出发菌株乙硫氨酸最小抑制浓度（MIC）测定
• 3.5.3 诱变前后菌株在含致死浓度平板上的生长情况
• 3.5.4 抗乙硫氨酸突变株的筛选
• 3.6 菌株诱变前后谷胱甘肽含量、产量的比较
• 3.7 遗传稳定性实验
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 论文发表情况
• 8 致谢