生物发酵法制备雄蚕蛾酒的研究

论文摘要

本实验以雄蚕蛾为原料,以中性蛋白酶酶活力为主要指标,从米曲霉As3.042、宁佐美曲霉、UE336、UE336-2、As3.811、米曲霉秋田筛选最优菌种。研究碳源种类及其添加量、种曲添加量、曲料含水量、培养温度、培养时间对制曲的影响,进行单因素、正交实验优化制曲条件。而后,用基酒对制好的曲料进行浸泡,以氨基态氮为主要指标,以浸泡时间、料液比、浸泡次数为单因素优化浸泡条件,对雄蚕蛾酒矿质元素、游离氨基酸、酒精度测定。将所得的雄蚕蛾酒经Sephadex G-25葡聚糖凝胶进行粗分离,并测定各组分分子量；用雄蚕蛾酒浸泡处理好的枸杞、桂圆等,每隔2-3 d搅动一次,浸泡15d后离心过滤。结果表明：菌种筛选UE336为最佳菌种,通过单因素、正交试验得出制曲较优条件：雄蚕蛾加入量为25 g,乳糖添加量为7%,曲料含水量为55%,制曲时间为60 h,制曲温度为29℃,种曲添加量为8%。曲料中性蛋白酶酶活力为7307.2 U/g、氨基态氮为0.77g/100g,对照样氨基态氮为0.27g/100g。以氨基态氮为主要指标,以浸泡时间、料液比、浸泡次数为单因素,最佳浸泡条件为：浸泡时间12 d、料液比1：18、浸泡2次,最佳浸泡条件下氨基态氮为0.171 g/100mL。经Sephadex G-25葡聚糖凝胶分离出三种组分,其分子量分别为1 1057.5 Da、450.8 Da和72.05 Da。矿质元素测定结果为：K：0.156g/mL、 Mn: 0.0133 g/mL、 F:0.24 g/mL、 Z:0.048 g/mL;酒精度测定结果为：52.9V/V；成品酒酒色为暗红色、澄清透明、酒香醇厚。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 雄蚕蛾的概念
• 1.2 雄蚕蛾的营养价值
• 1.2.1 蛋白质和氨基酸
• 1.2.2 脂肪酸
• 1.2.3 矿物质
• 1.2.4 维生素
• 1.2.5 激素类物质
• 1.2.6 其他成分
• 1.3 雄蚕蛾的保健作用
• 1.3.1 抗衰老作用
• 1.3.2 降血糖作用
• 1.3.3 防治白内障作用
• 1.3.4 雄性激素样作用
• 1.3.5 其他作用
• 1.4 雄蚕蛾开发利用情况
• 1.5 雄蚕蛾酒的营养滋补作用
• 1.6 本实验研究意义
• 1.7 本实验研究内容及实施方案
• 1.7.1 主要内容
• 1.7.2 实施方案
• 第二章 实验材料及方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 实验原料及试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 斜面培养基PDA的制备
• 2.2.2 种曲孢子数的测定
• 2.2.3 蛋白酶酶活力的测定（福林法）
• 2.2.3.1 福林试剂的制备
• 2.2.3.2 pH7.2磷酸缓冲液（0.1mol/L）的配制
• 2.2.3.3 pH3.0乳酸—乳酸钠缓冲液（0.05 mol/L）的配制
• 2.2.3.4 酪氨酸标准曲线的绘制
• 2.2.3.5 测定成曲蛋白酶活力
• 2.2.4 氨基态氮的测定
• 2.2.5 总酸的测定（pH计法）
• 2.2.5.1 试样的制备
• 2.2.5.2 计算
• 2.2.6 总酯的测定（电位滴定法）
• 2.2.6.1 试样的制备
• 2.2.6.2 仪器的准备
• 2.2.6.3 滴定
• 2.2.6.4 计算
• 2.2.7 多肽的粗分离及其分子量的测定
• 2.2.7.1 实验装置的安装
• 2.2.7.2 操作方法
• 2.2.8 矿质元素的测定—火焰原子吸收光谱法
• 2.2.8.1 原理
• 2.2.8.2 操作步骤
• 2.2.8.3 计算
• 2.2.9 其他指标的测定
• 2.3 工艺流程
• 2.3.1 种曲的制备
• 2.3.2 制曲工艺
• 2.3.3 菌种的筛选
• 2.3.3.1 单菌种筛选
• 2.3.3.2 混合菌种筛选
• 2.3.4 制曲条件的优化
• 2.3.4.1 碳源种类对制曲的影响
• 2.3.4.2 碳源添加量对制曲的影响
• 2.3.4.3 培养基水分含量对制曲的影响
• 2.3.4.4 培养温度对制曲的影响
• 2.3.4.5 培养时间对制曲的影响
• 2.3.4.6 种曲接种量对制曲的影响
• 2.3.4.7 雄蚕蛾制曲正交试验
• 2.3.5 浸泡条件的优化
• 2.3.5.1 料液比的确定
• 2.3.5.2 浸泡时间的确定
• 2.3.5.3 浸泡次数的确定
• 2.3.6 分子量的测定及枸杞、大枣等的浸泡
• 第三章 结果与分析
• 3.1 种曲孢子数测定
• 3.2 酪氨酸标准曲线的绘制
• 3.3 菌种筛选
• 3.3.1 单菌筛选
• 3.3.2 混菌筛选
• 3.3.3 单菌、混菌比较
• 3.4 制曲条件的选择
• 3.4.1 碳源的选择
• 3.4.2 碳源添加量的选择
• 3.4.3 水分添加量的选择
• 3.4.4 培养温度的选择
• 3.4.5 培养时间的确定
• 3.4.6 种曲添加量的选择
• 3.5 雄蚕蛾制曲正交试验
• 3.6 验证试验
• 3.7 浸泡条件的选择
• 3.7.1 料液比的选择
• 3.7.2 浸泡时间的选择
• 3.7.3 浸泡次数的选择
• 3.8 多肽的粗分离及其分子量的测定
• 3.8.1 采用Sephadex G-25对多进行粗分离
• 3.8.1.1 上样量的确定
• 3.8.1.2 流速的确定
• 3.8.2 多分子量的测定
• 3.8.2.1 内水体积和外水体积的测定
• 3.8.2.2 多分子量的测定
• 3.8.3 矿质元素的测定
• 3.8.4 游离氨基酸的测定
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢