GLP-1（7-36）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及作用机制

论文摘要

目的：研究GLP-1（7-36）对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响及作用机制。方法：正常糖（5mmol/l）和高糖（33mmol/l）环境下培养的HUVECs分别加入不同浓度的GLP-1（7-36）（0nmol/1,0.3nmol/l, 3nmol-1,30nmol/1）并干预不同时间（24h,48h,72h）,然后行MTT检测细胞活力以初步确定GLP-1（7-36）合适的干预时间及浓度点。实验分组如下：①正常糖浓度对照组（NG）、②高糖浓度损伤组（HG）、③高糖浓度下加入3nmol/l GLP-1组（HG+GLP-1）、④正常糖浓度下加入3nmol/l GLP-1组（NG+GLP-1）、⑤加P13K抑制剂的高糖并GLP-1组（HG+GLP-1+Wortmannin）.⑥加eNOS抑制剂的高糖并GLP-1组（HG+GLP-1+L-NAME）.各实验组分别采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率、western blot检测p-AKt和p-eNOS蛋白含量、一氧化氮检测试剂盒检测NO的浓度。结果：（1）HUVECs经高糖培养48h、72h后MTT检测细胞活力下降（p<0.05）,经3nmol/l、30nmol/l GLP-1（7-36）干预48h、72h后活力明显增加（p<0.01）,而干预相同时间点的不同浓度组之间无明显差异（p>0.05）；（2）HG组与NG组相比,细胞早期凋亡率显著增加（p<0.01）,p-AKt、p-eNOS蛋白表达下降（p<0.05）,NO的产量下降（p<0.05）；（3）HG+GLP-1组与HG组相比,细胞早期凋亡率下降（p<0.05）,p-AKt、p-eNOS蛋白表达上调（p<0.05）,NO的产量上升（p<0.05）；（4）HG+GLP-1+Wortmannin与HG+GLP-1相比,细胞早期凋亡率增加（p<0.05）,p-AKt.p-eNOS蛋白的表达下调（p<0.05）,NO水平下降（p<0.05）；（5）HG+GLP-1+L-NAME与HG+GLP一1相比,细胞早期凋亡率增加（p<0.05）,NO水平下降（p<0.05）,p-AKt蛋白的表达无明显变化。结论：GLP-1 （7-36）可改善高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡,P13K/AKt/eNOS通路的上调可能参与了该抗凋亡作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 本文主要的英汉缩略词名对照表
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验细胞株
• 2.1.2 试剂来源及配制
• 2.1.3 主要仪器和设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 实验分组
• 2.2.3 MTT检测细胞活力
• 2.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率
• 2.2.5 一氧化氮浓度测定
• 2.2.6 Western blot检测p-AKt和p-eNOS蛋白含量
• 2.2.7 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 HUVECs不同处理组干预不同时间后的MTT值检测结果
• 3.2 流式细胞仪检测HUVECs各实验组细胞早期凋亡率结果
• 3.3 各实验组细胞培养上清液一氧化氮浓度测定结果
• 3.4 Western blot检测HUVECs各实验组p-AKt和p-eNOS蛋白含量结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要成果