比卡鲁胺对映异构体的手性拆分与药物动力学研究

论文摘要

比卡鲁胺为非甾体类抗雄激素药物,与前列腺的雄激素受体选择性结合,竞争性抑制雄激素的活性,阻断了雄激素对前列腺肿瘤生长的促进作用,在临床上用于晚期前列腺癌的治疗,具有作用特异性强、耐受性好,口服给药方便有效,药效维持时间长等特点。1995年比卡鲁胺由英国AstraZeneca公司开发研制并上市,我国在1999年获准进口使用,2005年国产药物开发成功并上市。由于比卡鲁胺分子中具有手性中心,且两个对映体在体内的活性不同,其抗雄激素作用仅仅出现在R结构对映体上。但目前上市药物均为消旋体,所以比卡鲁胺对映体的手性拆分,单一对映体在体内代谢情况等的研究对于指导比卡鲁胺下一步的手性药物研发都显得尤为重要。本研究采用手性固定相正相高效液相色谱法成功拆分了比卡鲁胺对映体,并建立了同时测定大鼠血浆样品中比卡鲁胺单一对映体浓度的方法,研究了静脉注射给药后R型和S型比卡鲁胺对映体在大鼠体内的药代动力学;同时探索了如何用超滤法测定比卡鲁胺对映体与大鼠血浆蛋白的结合率。具体分为以下三个部分:1.建立手性固定相正相高效液相色谱拆分比卡鲁胺对映体:通过对色谱柱、流动相中异丙醇浓度、流速和温度等对对映体拆分的影响进行考察,确定拆分条件为:采用Chiralpak AD-H手性固定相,以正己烷-异丙醇（70:30,v/v）为流动相,检测波长270 nm,流速0.6 ml/min,柱温20℃。在此条件下,比卡鲁胺对映体分离完全,分离度为7.0,可为比卡鲁胺对映体的制备及定量研究提供参考。2.建立了手性固定相正相高效液相色谱对大鼠血浆中比卡鲁胺两个对映体同时进行测定的方法,并将其应用于大鼠尾静脉给药后的药代动力学研究。通过对合适的血浆样品预处理方法和色谱条件进行考察,发现血浆样品经丙酮沉淀,用Chiralpak IC手性色谱柱,以正己烷-异丙醇（77:23,v/v）为流动相,流速为0.8 mL·min-1,柱温为30℃,在270nm波长下进行检测,可同时分别测定大鼠血浆中R型和S型比卡鲁胺对映体的浓度。并对该方法进行了方法学验证,结果表明该方法具有灵敏、准确和操作简便的优点,能够满足对映体体内药物分析的要求。在此基础上还测定了比卡鲁胺消旋体给大鼠尾静脉给药后,R型和S型比卡鲁胺在大鼠体内的动力学过程,发现在大鼠体内S型比卡鲁胺比R型消除速率快。3.探索了超滤法测定比卡鲁胺对映体与大鼠血浆蛋白的结合率。蛋白结合的立体选择性研究对手性药物的开发及临床应用的安全性是非常必要的。比卡鲁胺对映体由于水溶性差,采用传统的超滤方法非特异性吸附率很高（大约80%）,故传统的超滤法不适合于比卡鲁胺与大鼠血浆蛋白结合率的测定。采用Taylor提出的改进超滤离心法,发现能有效减小比卡鲁胺与塑料超速离心装置的非特异性吸附;并通过对溶剂异丙醇对超滤管的溶出影响、比卡鲁胺在磷酸盐中的溶解性问题、磷酸盐对正相分析体系的影响、超滤方法、色谱条件等考察,测得比卡鲁胺消旋体血浆蛋白结合率为80%以上,且R型对映体的血浆蛋白结合率高于S型。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 手性药物的研究概况
• 1.1.1 手性化合物的基本知识
• 1.1.2 手性药物的发展
• 1.1.3 手性药物拆分的必要性
• 1.1.4 手性药物的拆分方法
• 1.1.5 手性高效液相色谱法
• 1.1.6 手性药物的药物动力学研究
• 1.1.7 手性药物与血浆蛋白结合的立体选择性
• 1.2 前列腺癌的研究概况
• 1.2.1 前列腺癌的概况
• 1.2.2 前列腺癌的药物治疗
• 1.3 比卡鲁胺的介绍
• 1.3.1 比卡鲁胺的概述
• 1.3.2 比卡鲁胺的结构和性质
• 1.4 本课题的研究目的和意义
• 第二章 手性固定相 NP-HPLC 法拆分比卡鲁胺对映体
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 方法与结果
• 2.2.1 溶液配制
• 2.2.2 检测波长的选择
• 2.2.3 手性固定相选择
• 2.2.4 异丙醇比例对手性分离的影响
• 2.2.5 温度对手性分离的影响
• 2.2.6 流速对手性分离的影响
• 2.2.7 色谱条件和系统适应性试验
• 2.2.8 构型测定
• 2.2.9 线性试验
• 2.2.10 精密度试验
• 2.3 本章小结
• 第三章 手性固定相 NP-HPLC 法测定大鼠血浆中比卡鲁胺对映体的浓度
• 3.1 仪器与试剂
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 实验动物
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 对照品溶液储备液的和比卡鲁胺注射液的配制
• 3.2.2 色谱条件
• 3.2.3 血浆样品预处理
• 3.2.4 比卡鲁胺对映体在大鼠体内药代动力学实验
• 3.3 方法学验证
• 3.3.1 方法的专属性
• 3.3.2 标准曲线的制备
• 3.3.3 回收率
• 3.3.4 精密度与准确度
• 3.3.5 稳定性考察
• 3.4 给药后大鼠体内比卡鲁胺对映体的血药浓度测定和药代动力学参数估算
• 3.5 讨论
• 3.5.1 色谱条件的选择
• 3.5.2 血样处理方法的选择
• 3.6 本章小结
• 第四章 超滤法测定比卡鲁胺对映体血浆蛋白结合率
• 4.1 仪器与试剂
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 血浆样品来源
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 比卡鲁胺异丙醇储备液配制
• 4.2.2 色谱条件
• 4.3 比卡鲁胺非特异性吸附测定
• 4.3.1 传统超滤法
• 4.3.2 改进后超滤法
• 4.4 比卡鲁胺血浆蛋白结合率测定
• 4.4.1 药物血浆蛋白溶液标准曲线
• 4.4.2 比卡鲁胺血浆蛋白结合率测定
• 4.5 讨论
• 4.5.1 溶剂对超滤管的影响
• 4.5.2 磷酸盐对于样品分析的影响
• 4.6 本章小结
• 第五章 研究总结与展望
• 5.1 研究工作总结
• 5.2 研究展望
• 致谢
• 硕士期间发表的论文
• 参考文献