论文摘要
视网膜缺血再灌注损伤的病理生理机制复杂,其中多种发病因素与细胞应激反应相关;Grp78是细胞内的一种应激蛋白,被认为是细胞应激反应的标志性分子,并具有保护细胞,对抗细胞调亡的作用,通过化学诱导剂或转基因技术等使grp78高表达可望为抵抗细胞凋亡提供新途径。本课题拟制备人grp78基因的重组真核表达载体,进行体内外基因转染实验,探讨grp78在视网膜缺血再灌注损伤中的保护作用。实验首先采用免疫组织化学和RT-PCR法检测大鼠视网膜缺血再灌注后grp78的时相性表达及定位表达,并分析其表达与细胞凋亡的关系;其次,构建人grp78真核表达载体pEGFP-grp78,转染体外培养的RPE细胞,经G418筛选,建立grp78基因稳定转染的RPE细胞系;然后分别采用氯化钴和过氧化氢诱导RPE细胞的缺氧和氧化模型,观察grp78基因转染对不同应激条件下RPE细胞损伤的保护作用;最后,构建大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,将pEGFP-grp78以脂质体介导转染大鼠视网膜,通过RT-PCR观察grp78的表达,通过Tunel法检测视网膜细胞凋亡、ERG检测视网膜功能,探讨grp78体内过表达对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。本研究的创新性在于构建人grp78基因真核表达载体,并通过体外细胞实验及体内动物实验证实grp78具有保护细胞,抵抗细胞凋亡的作用。
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