雷公藤多甙和大网膜脂肪提取液对成纤维细胞作用的研究

论文摘要

目的：建立胆管瘢痕组织成纤维细胞的体外培养模型，通过观察雷公藤多甙溶液及人大网膜脂肪组织提取液对成纤维细胞的影响，探讨其在胆管瘢痕形成中作用。方法：取胆管狭窄病人胆管瘢痕组织进行成纤维细胞体外培养；运用流式细胞仪对大网膜脂肪组织提取液的脂肪细胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10）进行测定分析，运用酶联免疫吸附（双抗体夹心）ELISA法检测大网膜脂肪组织提取液中人TGF-β1细胞因子；分别运用倒置显微镜、流式细胞仪、MTT法和透射电镜观察不同浓度的雷公藤多甙溶液和人大网膜脂肪组织提取液对成纤维细胞（KMB-117）的细胞形态、细胞周期及凋亡、细胞增殖和细胞超微结构的影响。结果：1．倒置显微镜下细胞形态学观察：雷公藤多甙对成纤维细胞生长增殖有明显抑制作用，随剂量和作用时间的增加，成纤维细胞胞体梭状突起回缩，极性消失，与邻近细胞接触减少，未见细胞分裂，细胞间间隙变大；大网膜脂肪组织提取液对成纤维细胞的增殖有抑制作用，实验组细胞数量减少，细胞间间隙增大，与邻近细胞接触减少，细胞体积缩小，排列紊乱，少见核分裂；2．流式细胞仪检测到大网膜脂肪组织可分泌TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等细胞因子，其中TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10与血液相比明显增高（P＜0.05）；3．酶联免疫吸附法检测到脂肪组织可分泌TGF-B1，与血液相比明显增高（P＜0.05）；4．流式细胞仪检测雷公藤多甙试验组成纤维细胞出现明显亚二倍体小峰，提示雷公藤多甙可促进细胞凋亡（P＜0.05），其对G2／M期和S期细胞均有明显抑制作用，抑制细胞增殖；大网膜脂肪组织提取液试验组细胞无明显亚二倍体小峰，提示脂肪组织提取液可抑制成纤维细胞凋亡（P＜0.05），使G0／G1期细胞增多，抑制细胞向G2／M期、S期转化，从而抑制成纤维细胞的增殖；5．MTT法观察细胞增殖：雷公藤多甙对成纤维细胞增殖有明显抑制作用（P＜0.05），其抑制率随时间和剂量的增大而增高；大网膜脂肪组织提取液也抑制成纤维细胞的增殖（P＜0.05）；6．透射电镜观察到雷公藤多甙溶液试验组细胞与正常成纤维细胞相比出现核染色质的浓缩、边聚、碎裂成块状，出现早期凋亡细胞，细胞质内空泡状变，线粒体肿胀、溶解，细胞间可见胶原纤维；脂肪组织提取液试验组细胞核内可见常染色质丰富、异染色质少，未见明显凋亡小体，胞内可见较多内质网池，大量残体，线粒体固缩。结论：建立胆管瘢痕成纤维细胞体外培养模型；研究发现雷公藤多甙在体外对成纤维细胞有明显抑制作用，促进其凋亡；研究发现大网膜脂肪组织可分泌如TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10等多种细胞因子，脂肪组织可抑制成纤维细胞凋亡，并抑制细胞的分裂增殖，可能对胆管的创伤愈合以及胆管瘢痕的形成起重要影响作用。

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