莱克多巴胺单克隆抗体的制备及初步应用

论文摘要

莱克多巴胺（Ractopamine,Rac）是一种β2-肾上腺素受体激动剂,最初被用来治疗支气管哮喘病,后来发现该药物还具有促进生长、营养重分配的作用,故被作为饲料添加剂用于畜禽生产。但动物或人直接或间接大量食入该药物时,可能会发生中毒。目前,我国禁止该药物用于养殖业。由于利益驱使,少数不法商人将该药物添加于动物饲料中,给国民健康带来潜在的威胁。本研究旨在制备特异针对Rac的单克隆抗体,并建立直接竞争酶联免疫吸附法（cELISA）用于Rac的残留检测。应用混合酸酐法,将莱克多巴胺分别与匙孔蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）、鸡血清白蛋白（OVA）以及辣根过氧化物酶（HRP）进行偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测定偶联物的蛋白浓度分别为3.6mg/ml、6.2 mg/ml、4.4 mg/ml、1.2 mg/ml。以Rac-KLH、Rac-BSA为免疫原,Rac-OVA为检测原,应用单克隆抗体技术获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F7、2G9、4D2、5A9。经间接竞争ELISA试验表明:Rac小分子对1F7、5A9两株细胞产生的单克隆抗体无竞争抑制作用,对2G9、4D2具有抑制作用,半数阻断浓度（IC50）分别为1000ng/ml、2ng/ml,亚类鉴定其免疫球蛋白亚类分别为IgM和IgG1,单抗腹水的间接ELISA效价分别为10×28和10×210。特异性鉴定结果显示,单抗与Rac的类似物盐酸克伦特罗及两种偶联载体均不发生交叉反应。上述结果表明单抗2G9、4D2可作为进一步建立竞争ELISA检测方法的生物材料。以单抗4D2包被酶标板,经方阵试验确定单抗的最佳包被浓度及酶标抗原的工作浓度,基于以上结果建立了用于检测Rac药物残留的直接竞争ELISA,对标准品的检测下限可达10ng/ml,线形检测范围为10-100ng/ml。根据标准品的检测结果可见,本方法可以作为Rac残留检测的筛检方法。本方法有待进一步提高敏感性,并进一步探索临床样品的处理条件。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 文献综述
• 研究内容
• 第一章 莱克多巴胺人工完全抗原的制备
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二章 莱克多巴胺单克隆抗体的制备与鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三章 莱克多巴胺单克隆抗体的初步应用
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录