川芎嗪对大鼠免疫损伤性肝纤维化的防治作用及相关机制的研究

论文摘要

目的分别通过猪血清腹腔注射建立大鼠体内肝纤维化模型、体外培养表型活化的肝星状细胞HSC-T6建立细胞模型，观察川芎嗪（TMP）对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用；以及对HSC-T6增殖、凋亡方面的影响，从而探讨TMP防治肝纤维化作用的相关机制。方法1．动物分组：清洁级雌性Wistar大鼠120只随机分为两个大组，预防组和治疗组。预防组大鼠60只再随机分为6组：正常对照组（N）10只、模型对照组（M）18只、苦参素阳性对照组（OM）8只、TMP低剂量组（TMP-L）8只、TMP中剂量组（TMP-M）8只和TMP高剂量组（TMP-H）8只。治疗组大鼠60只分组方式同预防组。2．模型建立：采用腹腔注射猪血清建立大鼠免疫损伤性肝纤维化模型，预防组和治疗组大鼠除N组外，其余大鼠均腹腔注射猪血清0.5ml/次/只，每周2次，持续8周。分别于造模开始的第4，6，7周末，随机抽取预防组中N组1只，M组大鼠3只，取肝脏做病理切片，观察模型复制情况。3．给药方式：预防组大鼠在造模同时给予药物干预，其中OM和TMP药物干预组分别腹腔注射OM60mg/kg、TMP10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg每天1次，N组和M组分别腹腔注射氯化钠注射液10ml/kg作为对照，给药持续8周；治疗组从第9周起停止注射猪血清，开始给予药物干预，给药方式和剂量同预防组。在第11、13、15周末，随机抽取治疗组中N组大鼠1只，M组大鼠各3只，取肝脏做病理切片，观察模型有无自愈情况。4．样本采集：采集样本前，大鼠禁食12h。预防组大鼠在第8周末，眼内眦取血，分离血清备用。断颈处死大鼠后取肝脏第4叶组织，置10％甲醛中固定，石蜡包埋、切片。治疗组大鼠在第16周末采集样本，方法同预防组。5．指标测定：HE染色观察肝组织病理形态学改变，并进行肝纤维化分级；观察TMP对血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白（A）、球蛋白（G）含量的影响；放射免疫法检测TMP对血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、血清Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）、血清Ⅳ型胶原（C-IV）含量的影响；免疫组织化学SP法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在肝组织中的表达并进行半定量评价。6．体外培养HSC-T6，用不同浓度的TMP进行干预，观察TMP对HSC-T6的作用；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）染色法观察TMP对HSC-T6增殖的抑制作用；应用吖啶橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色法与流式细胞仪检测TMP对HSC-T6凋亡的影响。结果1、TMP可显著改善大鼠肝纤维化，预防组和治疗组中TMP干预的大鼠肝纤维化分级程度与各自M组相比明显减轻（P<0.01）。2、TMP20mg/kg、40mg/kg腹腔注射可显著降低大鼠血清ALT、AST、ALP水平，提高A/G比值（P<0.01）。3、TMP20mg/kg、40mg/kg腹腔注射可显著降低肝纤维化大鼠血清HA、LN、PⅢNP、C-IV水平（P<0.01）。4、与模型组相比，在大鼠肝纤维化形成过程中和肝纤维化形成后腹腔注射TMP10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg可下调TGF-β1、TIMP-1表达（P<0.01）。5、TMP0.10mg/ml即可表现出对HSC-T6的增殖抑制作用（P<0.05或P<0.01）；促进其凋亡（P<0.05或P<0.01），并且这些作用存在良好的剂量相关性。结论川芎嗪对猪血清诱导的大鼠实验性肝纤维化具有明显的预防和治疗作用；其作用机制与拮抗细胞因子TGF-β1、抑制TIMP-1表达增高，从而促进胶原降解；抑制肝星状细胞活化并促进活化的肝星状细胞凋亡相关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分 川芎嗪对大鼠免疫损伤性肝纤维化的防治作用及相关机制的研究
• 前言
• 第一部分 TMP对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用及相关机制的实验研究
• 一:实验材料
• 二:实验方法
• 三:结果
• 五:讨论
• 六:结论
• 参考文献
• 第二部分 TMP诱导人肝星状细胞凋亡的研究
• 一:实验材料
• 二:方法
• 三:结果
• 四:讨论
• 五:结论
• 参考文献
• 全文小结
• 图片资料
• 综述部分 川芎嗪抗器官纤维化的研究概述
• 参考文献
• 后记
• 英文缩略词注解
• 致谢