论文摘要
舌鳞状细胞癌是口腔癌中发病率较高的一种,治疗方法以手术加放疗为主。然而放疗常因射线对正常组织损伤或肿瘤对射线的抵抗而受到影响,临床上常通过使用放射增敏剂来提高射线对肿瘤细胞的杀灭作用,因此,选择良好的放射增敏剂已成为优化舌癌治疗的新途径。甘氨双唑钠（Sodium Glycididazole, CMNa）是我国第二军医大学研制合成的具有自主知识产权的硝基咪唑类肿瘤放射增敏剂。它针对国内外放射增敏剂毒副作用大的难题,依据增敏药物能消除肿瘤细胞内乏氧细胞对射线的抗性,提出在增强杀灭肿瘤细胞、提高肿瘤放疗效果的同时又使不良毒副反应最小的设想。目前已有临床研究证实该药对鼻咽癌、肺癌、宫颈癌、食管癌等有明显的放疗增敏作用,可提高肿瘤放疗的痊愈率,明显降低射线的照射剂量,但未见对舌癌的放射增敏研究。吴茱萸碱（evodiamine, EVO）是芸香科植物吴茱萸的近成熟果实的提取物。近年来众多研究表明EVO对恶性黑色素瘤、前列腺癌、肝癌,、甲状腺癌、胃癌和结肠癌等多种肿瘤具有抗肿瘤作用,甚至对多药耐药的肿瘤细胞仍然具有抗癌的活性,未见关于EVO放射增敏作用的任何研究报道。本研究旨在探讨CMNa和EVO联合射线对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞放射增敏及粘附的影响,以期为舌癌临床放射增敏剂的选择提供新的思路。本研究主要分为两个部分：1.CMNa对Tea-8113细胞体外放射增敏及粘附作用的影响取对数生长期的Tca-8113细胞作为研究对象,MTT比色实验检测CMNa对Tca-8113细胞增殖的影响,结果显示Tca-8113细胞的存活率随CMNa作用浓度及作用时间的增加而降低；克隆形成实验检测CMNa联合不同剂量射线对Tca-8113细胞克隆形成能力的影响,用多靶单击模型拟合细胞生存曲线,得出放射生物学敏感参数Do为1.48,放射增敏比为1.68；流式细胞术FITC和PI双染比较不同放射剂量处理和CMNa联合不同剂量射线处理后细胞凋亡的变化,CMNa联合不同剂量射线（2,4,6 Gy）的凋亡率（49.6%,63.1%,78.8%）均显著高于单纯放射组（30.0%,53.9%,61.2%）（P<0.01）；同质粘附实验检测CMNa联合射线处理前后细胞粘附能力的改变,在振荡20 min时单纯放射组及联合组与对照组相比,粘附细胞数显著增高（P<0.01）；但单纯放射组与联合组相比粘附细胞数无显著差异（P>0.05）。在振荡40和60 min时,单纯放射组及联合组与对照组相比,粘附细胞数显著增高（P<0.01）；且联合组与单纯放射组相比,粘附细胞数有显著性差别（P<0.01）。2.EVO联合射线对Tca-8113细胞增殖,粘附和迁移的影响MTT比色实验检测EVO对Tca-8113细胞增殖及放射增敏的影响,结果显示不同放射剂量和处理后的不同时间EVO+放射组的细胞存活率均显著低于单纯放射组（P<0.01）；克隆形成实验检测EVO联合射线对Tca-8113细胞克隆形成能力的影响,结果求得EVO的SERDo=1.35; SERDq=1.75; SERSF2=1.67;流式细胞术PI染色检测细胞周期,EVO+放射组细胞周期与单纯放射组相比G2/M期细胞显著增多,且随照射剂量的增加而愈明显；流式细胞术FITC和PI双染比较不同放射剂量处理和EVO联合不同剂量射线处理后细胞凋亡变化,EVO和不同剂量射线照射均可诱导细胞凋亡,但EVO+放射组细胞凋亡率明显高于单纯照射组（P<0.01）,且凋亡率随照射剂量的增加而增大；细胞粘附和划痕实验检测细胞粘附和迁移能力的改变,同质粘附实验显示20,40,60 min时单纯放射组及EVO+放射组与对照组相比,粘附细胞数显著增高（P<0.01）；且在40和60 min时,EVO+放射组与单纯放射组相比粘附细胞数亦显著增加（P<0.01）。与血管内皮细胞的粘附实验在20,40,60 min时,EVO+放射组与单纯放射组及对照组相比粘附率均显著下降（P<0.05）；划痕实验的结果显示EVO联合放射组细胞迁移率显著低于对照组和单纯放射组（P<0.01）。Real time PCR检测caspase 3、caspase 9和survivin mRNA表达的变化,结果表明不同照射剂量下EVO+放射组与单纯放射组相比caspase 3 mRNA和caspase 9 mRNA的表达均显著提高（P<0.05）,在0 Gy和2 Gy时EVO+放射组survivin mRNA的表达要显著低于单纯放射组（P<0.05）。结论CMNa对Tca-8113细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能与促进细胞凋亡有关。且CMNa联合射线可改变Tca-8113细胞的同质粘附能力,有可能通过提高肿瘤细胞的同质黏附能力达到抑制肿瘤细胞转移的作用。EVO也对Tca-8113细胞有放射增敏作用,并能改变Tca-8113细胞的粘附和迁移能力,其增敏作用机制可能与上调caspase 3 mRNA和caspase 9 mRNA的表达,下调survivin mRNA的表达,促进细胞的凋亡和将肿瘤细胞阻滞在对射线最为敏感的G2/M期有关。EVO联合射线有可能通过提高肿瘤细胞的同质黏附能力,抑制其和血管内皮细胞的黏附以及细胞的迁移,从而抑制肿瘤的侵袭和转移。