茶多酚对奶牛乳腺上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

论文摘要

茶被认为是世界上仅次于水的最普遍消费的饮品。常规的使用绿茶,有许多益处,比如防治心血管机能紊乱,肥胖,炎症,以及抗病毒,抗细菌感染。茶多酚（green tea polyphenols, GTP）是茶叶中多酚类物质及其衍生物的总称,主要由儿茶素（主要活性物质）、黄酮类、花青素、花白素和酚酸等物质组成。其中儿茶素是茶多酚中主要的多酚类化合物,约占茶多酚的60%～80%,主要有表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）4种,其中含量最高的是EGCG,占到儿茶素的50%左右。对茶及GTP的研究已有大量文献报道,其中研究茶多酚对癌细胞凋亡的影响比较多,但对正常细胞的研究比较少,对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的影响未见报道。本文用过氧化氢（H2O2）处理体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,建立氧化应激损伤细胞模型,研究茶多酚对氧化应激所致的奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。运用MTT法检测细胞存活率；比色法检测细胞培养液中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性；Hoechst33342/PI染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。同时,分光光度法检测凋亡因子caspase-3的活性。研究结果如下：（1）与对照组相比,在培养基中添加20-100μg/mL的茶多酚,乳腺上皮细胞的存活率没有明显差异。随着培养时间延长,细胞存活率在12h,24h,48h内上升。继续增大茶多酚的浓度,细胞存活率开始有所下降。所以选用茶多酚作用浓度（20～100μg/mL）与作用时间（48h）进行之后的实验。（2）与过氧化氢损伤模型组相比,20-100μg/mL的茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH活性下降,其中以100μg/mL茶多酚处理组效果最显著,说明一定浓度的茶多酚可以缓解氧化应激所导致的奶牛乳腺上皮细胞的损伤,提高抗氧化能力。（3）茶多酚可以使氧化应激损伤的乳腺上皮细胞的caspase-3活性降低,并且可以使细胞凋亡率下降。通过本实验,得出以下结论：茶多酚对乳腺上皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能是通过抑制caspase-3酶活性,阻断氧化损伤导致的细胞凋亡途径,降低MDA含量,增强SOD活性,对细胞起到保护作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语中英文对照（Abbreviation ）
• 第一章 文献综述
• 1 茶多酚概述
• 1.1 茶多酚的结构组成
• 1.2 茶多酚的理化性质
• 1.3 茶多酚的制备方法
• 2 茶多酚的生物学功能
• 2.1 抗氧化作用
• 2.2 增强机体免疫力
• 2.3 杀菌抗病毒作用
• 2.4 抗衰老与抗辐射作用
• 2.5 对重金属盐和生物碱中毒的抗解作用
• 2.6 茶多酚抗过敏作用
• 3 茶多酚的抗癌作用
• 3.1 抑制亚硝酸盐形成反应
• 3.2 茶多酚对信号传导通路的选择性阻断作用
• 3.3 抑制致癌物前体的代谢活化
• 3.4 茶多酚抑制肿瘤细胞的增殖
• 4 茶多酚在动物体内的代谢
• 5 茶多酚在畜牧生产中的应用
• 5.1 在饲料工业中的应用
• 5.2 在养猪业上的应用
• 5.3 在养禽业的应用
• 5.4 应用前景
• 6 本研究的目的和意义
• 参考文献
• 第二章 实验研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 奶牛乳腺上皮细胞的形态学鉴定及其生长曲线
• 2.2 过氧化氢对乳腺上皮细胞存活率的影响
• 2.3 茶多酚对乳腺上皮细胞存活率的影响
• 2.4 茶多酚对氧化应激模型下奶牛乳腺上皮细胞的存活率的影响
• 2.5 茶多酚对乳腺上皮细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）含量的影响
• 2.6 茶多酚对乳腺上皮细胞凋亡的影响
• 2.7 乳腺上皮细胞caspase-3活性分析
• 3 讨论
• 3.1 氧化应激损伤模型
• 3.2 茶多酚提高乳腺上皮细胞的抗氧化能力
• 3.3 茶多酚缓解氧化应激诱导的乳腺上皮细胞凋亡
• 参考文献
• 全文结论
• 附录
• 硕士期间发表论文
• 致谢