论文摘要
目的 2,3-吲哚醌（indol2,3-dione,isatin,MW147）又名靛红,是存在于龙虾并维持其生存所必需的一种天然活性物质,也存在于经典抗癌中药青黛中,又是我国独创Ⅰ类抗癌新药靛玉红的先导化合物。本课题组已经通过小鼠移植瘤模型证明2,3-吲哚醌在体内可以抑制多种肿瘤,并且抑瘤作用呈现量效关系。本文主要针对2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞（SHSY-5Y）的抗肿瘤作用进行研究,并探讨其作用机制,以期开发2,3-吲哚醌在抗癌方面的药用价值。 方法 ①细胞凋亡检测—核染色（Hoechst33258染色）:人神经母瘤细胞（SHSY-5Y）分为2,3-吲哚醌加药组（50,100,200μM组）和阴性对照组（二甲亚砜）,与2,3-吲哚醌作用80小时后,Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞核形态学变化。 ②细胞增殖活性测定—MTT比色法:人神经母瘤细胞（SHSY-5Y）分为2,3-吲哚醌加药组（50,100,200,300μM组）和二甲亚砜阴性对照组。2,3-吲哚醌作用48小时后,MTT比色法测定各组细胞在490nm的吸光度值（O.D.）,分析并计算不同浓度药物组对细胞增殖的抑制率。 ③ELISA法测定血管内皮细胞生长因子（VEGF）分泌:神经母瘤细胞（SHSY-5Y）分为2,3-吲哚醌加药组（50,100,200μM组）和二甲亚砜阴性对照组。2,3-吲哚醌作用24小时后,离心取细胞上清液,ELISA试剂盒测定上清液中VEGF的含量,并收集各孔细胞进行细胞计数。VEGF的自分泌情况表达为pg protein/ml/105cells/24h。 ④Western-blot测定磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白（pp42/pp44）的相对表达情况:人神经母瘤细胞（SHSY-5Y）分为2,3-吲哚醌加药组（50,100,200μM组）和二甲亚砜阴性对照组,经不同浓度药物处理后,提取蛋白（Lowery法蛋白定量）,10%SDS-PAGE电泳,然后电转移至PVDF膜上。封闭膜后,分别与一抗、二抗和化学发光剂作用,与X光胶片成像。观察磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶（pp42/pp44）的相对表达情况。 结果 ①2,3-吲哚醌药物组的细胞核出现典型的凋亡形态学改变:细胞核染色质高度聚集,并裂解为碎块,产生了凋亡小体。而对照组的细胞没有出现这些细胞核染色质的形态学改变。 ②MTT法所得吸光度（O.D.值）结果显示各浓度2,3-吲哚醌加药组O.D.值均明显低于阴性对照组（P<0.01）,并且高浓度2,3-吲哚醌（300μM组）对人神经母瘤细
论文目录
相关论文文献
标签：吲哚醌论文; 凋亡论文; 抗增殖论文; 血管内皮生长因子论文; 有丝分裂原激活的蛋白激酶论文;