首页> 正文

利用RNA干扰抑制人肝癌细胞N-ras表达的研究

2020-11-23阅读(879)

利用RNA干扰抑制人肝癌细胞N-ras表达的研究

论文摘要

目的:寻找人肝癌细胞N-ras基因的RNA干涉有效靶点;建立装载靶向N-RAS基因干扰RNA质粒表达载体;利用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞Bel-7402细胞株N-ras基因的表达,达到抑制人肝癌细胞细胞增殖、促进其凋亡的目的,为肿瘤基因治疗奠定基础并开拓新思路。方法:利用计算机网络资源及Oligo6.0、Blast Research等生物学软件在N-RAS基因编码区寻找RNAi有效靶点;以体内转录的方法构建Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras质粒;应用真核细胞转染技术转染人肝癌细胞Bel-7402细胞株,以转染带有不相关shRNA结构的载体的Bel-7402细胞为对照排除非特异性抑制作用;通过RT-PCR检测N-ras基因mRNA水平的表达;Western-blot检测N-ras基因蛋白水平的表达;MTT法检测转染后细胞增殖受抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:成功找到RNA干涉的有效序列1个;酶切法证明构建Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras质粒成功;RT-PCR和Western-blot分析表明:Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras-2在mRNA水平和蛋白水平特异性抑制了N-ras基因的表达;MTT结果显示:Psilencerl.0-U6-N-ras-2转染的肝癌细胞与其他三组比较细胞增殖明显受抑制;流式细胞仪证实转染Psilencerl.0-U6-N-ras-2能诱导肝癌细胞凋亡。结论:RNA干涉是抑制基因表达的有效策略;脂质体介导法可以有效转染Bel-7402细胞,是进行肝癌基因治疗的有效转染方法;Bel-7402细胞是N-ras高表达细胞株;N-ras-2序列（AAGACCAGACAGGGTGTTGAA）是抑制人肝癌细胞株Bel-7402的N-ras基因表达的RNA干涉有效靶点,而N-ras-1（GTGCCATGAGAGACCAATA）序列则不是;利用脂质体介导针对N-ras的短发夹结构RNA可以有效地抑制肝癌细胞中N-ras的表达及肝癌细胞增殖,诱导其凋亡。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 前 言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 ras 基因与人类肿瘤
  • 参考文献
  • 第二章 RNA 干涉研究进展
  • 参考文献
  • 第二篇 实验研究
  • 第一章 人肝癌细胞N-ras 基因RNA 干涉有效靶点的确定
  • 第一节 引言
  • 第二节 材料与方法
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 第二章 人肝癌细胞N-ras 基因RNA 干涉重组体的构建及序列分析
  • 第一节 实验材料
  • 第二节 实验方法
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 第三章 RNA 干扰对Bel-7402 细胞株:N-ras 表达的抑制
  • 第一节 材料与方法
  • 第二节 结果
  • 第三节 讨论
  • 参考文献
  • 第四章 结论
  • 第五章 创新性总结
  • 攻博期间发表的学术论文
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].抑制肝癌HepG2细胞N-Ras基因表达对放射敏感性的影响[J]. 蚌埠医学院学报 2010(09)
    • [2].miRNA-326及N-ras基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的研究[J]. 实验与检验医学 2019(06)
    • [3].RT-PCR法检测白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达[J]. 浙江中西医结合杂志 2009(05)
    • [4].中药复方对急性髓细胞性白血病干细胞Flt3和N-ras基因表达的影响(英文)[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2009(40)
    • [5].伴N-RAS及CBL突变的幼年型粒单核细胞白血病快速急变后单倍体移植1例报告并文献复习[J]. 中国小儿血液与肿瘤杂志 2019(01)
    • [6].N-Ras基因表达沉默与二羟环氧苯并芘转化的人支气管上皮细胞生长的关系[J]. 毒理学杂志 2009(02)
    • [7].N-ras在自发性高血压和两肾一夹型高血压大鼠肾脏动脉丛表达的比较研究[J]. 宁夏医科大学学报 2013(06)
    • [8].IGF-Ⅱ对肝癌细胞MHCC97-H癌基因C-myc和N-ras表达的影响[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2015(05)
    • [9].桦菌芝多糖G-F组对HepA小鼠抑瘤率、HepA瘤细胞N-ras蛋白表达的影响[J]. 中医药信息 2009(04)
    • [10].原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因mRNA表达的影响[J]. 中医药信息 2008(05)
    • [11].N-Ras~(G12D)基因突变体真核表达载体的构建及其鉴定[J]. 科学技术与工程 2013(13)
    • [12].急性髓性白血病N-ras基因突变的检测及临床意义[J]. 中华临床医师杂志(电子版) 2010(10)
    • [13].N-Ras基因靶向的shRNA抑制二羟环氧苯并芘诱导的恶变细胞增殖[J]. 环境与健康杂志 2009(02)
    • [14].树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因表达的影响[J]. 同济大学学报(医学版) 2008(01)
    • [15].microRNA98靶向N-RAS对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响[J]. 解剖科学进展 2019(03)
    • [16].建立一种N-ras突变检测的“凸背”引物荧光PCR新技术[J]. 分子诊断与治疗杂志 2015(01)
    • [17].益气养阴方及其拆方影响急性髓细胞白血病细胞Flt3和N-ras表达研究[J]. 中国中西医结合杂志 2010(06)
    • [18].黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构观察及N-ras表达变化[J]. 中国预防医学杂志 2010(07)
    • [19].树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc蛋白表达的影响[J]. 中医药信息 2008(06)
    • [20].利用GST融合蛋白表达系统表达与纯化人N-Ras蛋白[J]. 生物技术通讯 2015(04)
    • [21].杞菊合剂防治高血压左室肥厚机制研究[J]. 中华中医药学刊 2011(05)

    标签：;  ;  ;  ;  

    利用RNA干扰抑制人肝癌细胞N-ras表达的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5