本文主要研究内容
作者刘彦君（2019）在《吡喃型蓝莓花青素苷元的制备及对HeLa细胞抑制作用和机制研究》一文中研究指出：本论文研究内容隶属吉林省科技厅十三五项目（JJKH201800 90KJ）。吡喃花青素是近二十多年来从陈年葡萄酒滤液中检测到的一种新型花青素衍生物,因其具有高稳定性而受到广泛关注,在食品、保健品中具有良好的应用前景。本文以长白山野生蓝莓为原料,提取制备了蓝莓花青素以及花青素苷元,将花青素苷元与丙酮反应合成了吡喃花青素苷元,并通过HPLC和HPLC-MS法对其成分和结构进行了分析鉴定。然后对吡喃花青素苷元的稳定性、抗氧化活性和对肿瘤细胞的抑制作用进行了比较分析,以人宫颈癌HeLa细胞株为体外细胞模型,探究了其对HeLa细胞的活性、形态、细胞周期分布、凋亡的影响,并分别用花青素苷元和蓝莓花青素作为对照样品进行了分析评价,最后利用Western blot技术对于HeLa细胞内相关蛋白表达水平变化进行了分析。主要研究如下:1、采用组合柱层析法从蓝莓果实中提取花青素和花青素苷元,再通过亲核加成反应,由花青素苷元与丙酮反应合成了吡喃花青素苷元,并优化合成方法,得到吡喃花青素苷元合成的最佳方法为:先将花青素苷元粉末以3.0mg/mL的浓度溶解在60%的乙醇水溶液中,再与3倍体积比的丙酮混合,用HCl溶液调整体系pH为3.0,在42℃的水域环境中避光反应15d。提取产物通过逐级分离纯化后用高效液相色谱对其进行定量分析,其中,蓝莓花青素、花青素苷元、吡喃花青素苷元的提取物纯度依次分别为63.5%、71.8%和70.2%。2、通过半制备高效液相色谱法对吡喃花青素苷元进行了提纯后,采用高效液相-质谱联用法对其组成和结构进行了分析和鉴定,利用质谱扫描碎片离子的质荷比,鉴定出了吡喃花青素苷元提取物中的5种组分,依出峰顺序分别为:甲基吡喃飞燕草素、甲基吡喃矢车菊素、甲基吡喃矮牵牛色素、甲基吡喃芍药色素与甲基吡喃锦葵色素。这正与花青素苷元提取物中的5组色素依次对应,并且与高效液相色谱法分析的结果相一致。3、对吡喃花青素苷元在不同pH、温度、加热时间和金属离子作用下稳定性以及对DPPH、ABTS+自由基清除能力进行了研究。（1）pH稳定性研究结果表明:当溶液pH大于3.0时,花青素和花青素苷元的稳定性显著下降,而吡喃花青素苷元在3.09.0的酸碱度范围内,稳定性几乎保持不变;（2）热稳定性的研究表明:花青素和吡喃花青素苷元水溶液在不同加热温度和加热时间条件下的稳定性显著高于花青素苷元;（3）金属离子稳定性的研究表明:Fe3+离子对于三种蓝莓花青素提取物都具有明显的褪色作用,而Na+、Al3+、Cu2+、Mn2+离子在较低浓度时则具有一定的增色效应,高浓度时也会降低样品的吸光度值,其中金属离子对花青素苷元的影响最大,吡喃花青素苷元和花青素则表现出更高的耐受性;（4）自由基清除能力的研究结果表明:以Trolox抗氧化当量为依据,三种花青素样品对DPPH、ABTS+自由基有很强的清除能力,从强到弱依次为:花青素苷元>吡喃花青素苷元>花青素。4、通过用不同浓度的吡喃花青素苷元、花青素苷元和花青素提取物处理HeLa细胞后,以MTT法检测了其对细胞活力的影响,以Calcein-AM/PI双染色法观察了细胞死/活状态,并利用流式细胞仪,对细胞的周期和凋亡进行了检测,研究发现,用样品处理24h后细胞活力呈剂量依赖性下降,其中花青素苷元处理的HeLa细胞显示出最低的IC50值（275.33±1.67μg/mL）,其次是吡喃花青素苷元(IC50值为536.91±2.03μg/mL),而花青素的毒性最小(IC50值为1095.28±1.72μg/mL)。Calcein-AM/PI双染色研究结果与MTT法的毒性评价基本一致,均表明花青素苷元对HeLa细胞的抑制作用最强,其次是吡喃花青素苷元,花青素作用最弱。通过流式细胞仪检测发现,三种花青素样品能够引起HeLa细胞周期在G2/M期发生阻滞,并且能显著通过诱导细胞凋亡来抑制HeLa细胞的增殖。5、通过蛋白质免疫印迹分析技术检测了HeLa细胞内相关蛋白（p53、p38-MAPK和Caspase-3）的表达水平变化。其中p53蛋白的表达水平通常被用作G2/M期细胞周期停滞的标志物,并且p53和p38-MAPK的上调以及Caspase-3的激活说明HeLa细胞可能通过线粒体内的凋亡途径引发了细胞凋亡,从而抑制了HeLa细胞的增殖,为进一步阐明吡喃花青素苷元影响细胞周期阻滞和细胞凋亡的可能机制奠定了基础。
Abstract
ben lun wen yan jiu nei rong li shu ji lin sheng ke ji ting shi san wu xiang mu （JJKH201800 90KJ）。bi nan hua qing su shi jin er shi duo nian lai cong chen nian pu tao jiu lv ye zhong jian ce dao de yi chong xin xing hua qing su yan sheng wu ,yin ji ju you gao wen ding xing er shou dao an fan guan zhu ,zai shi pin 、bao jian pin zhong ju you liang hao de ying yong qian jing 。ben wen yi chang bai shan ye sheng lan mei wei yuan liao ,di qu zhi bei le lan mei hua qing su yi ji hua qing su gan yuan ,jiang hua qing su gan yuan yu bing tong fan ying ge cheng le bi nan hua qing su gan yuan ,bing tong guo HPLChe HPLC-MSfa dui ji cheng fen he jie gou jin hang le fen xi jian ding 。ran hou dui bi nan hua qing su gan yuan de wen ding xing 、kang yang hua huo xing he dui zhong liu xi bao de yi zhi zuo yong jin hang le bi jiao fen xi ,yi ren gong geng ai HeLaxi bao zhu wei ti wai xi bao mo xing ,tan jiu le ji dui HeLaxi bao de huo xing 、xing tai 、xi bao zhou ji fen bu 、diao wang de ying xiang ,bing fen bie yong hua qing su gan yuan he lan mei hua qing su zuo wei dui zhao yang pin jin hang le fen xi ping jia ,zui hou li yong Western blotji shu dui yu HeLaxi bao nei xiang guan dan bai biao da shui ping bian hua jin hang le fen xi 。zhu yao yan jiu ru xia :1、cai yong zu ge zhu ceng xi fa cong lan mei guo shi zhong di qu hua qing su he hua qing su gan yuan ,zai tong guo qin he jia cheng fan ying ,you hua qing su gan yuan yu bing tong fan ying ge cheng le bi nan hua qing su gan yuan ,bing you hua ge cheng fang fa ,de dao bi nan hua qing su gan yuan ge cheng de zui jia fang fa wei :xian jiang hua qing su gan yuan fen mo yi 3.0mg/mLde nong du rong jie zai 60%de yi chun shui rong ye zhong ,zai yu 3bei ti ji bi de bing tong hun ge ,yong HClrong ye diao zheng ti ji pHwei 3.0,zai 42℃de shui yu huan jing zhong bi guang fan ying 15d。di qu chan wu tong guo zhu ji fen li chun hua hou yong gao xiao ye xiang se pu dui ji jin hang ding liang fen xi ,ji zhong ,lan mei hua qing su 、hua qing su gan yuan 、bi nan hua qing su gan yuan de di qu wu chun du yi ci fen bie wei 63.5%、71.8%he 70.2%。2、tong guo ban zhi bei gao xiao ye xiang se pu fa dui bi nan hua qing su gan yuan jin hang le di chun hou ,cai yong gao xiao ye xiang -zhi pu lian yong fa dui ji zu cheng he jie gou jin hang le fen xi he jian ding ,li yong zhi pu sao miao sui pian li zi de zhi he bi ,jian ding chu le bi nan hua qing su gan yuan di qu wu zhong de 5chong zu fen ,yi chu feng shun xu fen bie wei :jia ji bi nan fei yan cao su 、jia ji bi nan shi che ju su 、jia ji bi nan ai qian niu se su 、jia ji bi nan shao yao se su yu jia ji bi nan jin kui se su 。zhe zheng yu hua qing su gan yuan di qu wu zhong de 5zu se su yi ci dui ying ,bing ju yu gao xiao ye xiang se pu fa fen xi de jie guo xiang yi zhi 。3、dui bi nan hua qing su gan yuan zai bu tong pH、wen du 、jia re shi jian he jin shu li zi zuo yong xia wen ding xing yi ji dui DPPH、ABTS+zi you ji qing chu neng li jin hang le yan jiu 。（1）pHwen ding xing yan jiu jie guo biao ming :dang rong ye pHda yu 3.0shi ,hua qing su he hua qing su gan yuan de wen ding xing xian zhe xia jiang ,er bi nan hua qing su gan yuan zai 3.09.0de suan jian du fan wei nei ,wen ding xing ji hu bao chi bu bian ;（2）re wen ding xing de yan jiu biao ming :hua qing su he bi nan hua qing su gan yuan shui rong ye zai bu tong jia re wen du he jia re shi jian tiao jian xia de wen ding xing xian zhe gao yu hua qing su gan yuan ;（3）jin shu li zi wen ding xing de yan jiu biao ming :Fe3+li zi dui yu san chong lan mei hua qing su di qu wu dou ju you ming xian de tui se zuo yong ,er Na+、Al3+、Cu2+、Mn2+li zi zai jiao di nong du shi ze ju you yi ding de zeng se xiao ying ,gao nong du shi ye hui jiang di yang pin de xi guang du zhi ,ji zhong jin shu li zi dui hua qing su gan yuan de ying xiang zui da ,bi nan hua qing su gan yuan he hua qing su ze biao xian chu geng gao de nai shou xing ;（4）zi you ji qing chu neng li de yan jiu jie guo biao ming :yi Troloxkang yang hua dang liang wei yi ju ,san chong hua qing su yang pin dui DPPH、ABTS+zi you ji you hen jiang de qing chu neng li ,cong jiang dao ruo yi ci wei :hua qing su gan yuan >bi nan hua qing su gan yuan >hua qing su 。4、tong guo yong bu tong nong du de bi nan hua qing su gan yuan 、hua qing su gan yuan he hua qing su di qu wu chu li HeLaxi bao hou ,yi MTTfa jian ce le ji dui xi bao huo li de ying xiang ,yi Calcein-AM/PIshuang ran se fa guan cha le xi bao si /huo zhuang tai ,bing li yong liu shi xi bao yi ,dui xi bao de zhou ji he diao wang jin hang le jian ce ,yan jiu fa xian ,yong yang pin chu li 24hhou xi bao huo li cheng ji liang yi lai xing xia jiang ,ji zhong hua qing su gan yuan chu li de HeLaxi bao xian shi chu zui di de IC50zhi （275.33±1.67μg/mL）,ji ci shi bi nan hua qing su gan yuan (IC50zhi wei 536.91±2.03μg/mL),er hua qing su de du xing zui xiao (IC50zhi wei 1095.28±1.72μg/mL)。Calcein-AM/PIshuang ran se yan jiu jie guo yu MTTfa de du xing ping jia ji ben yi zhi ,jun biao ming hua qing su gan yuan dui HeLaxi bao de yi zhi zuo yong zui jiang ,ji ci shi bi nan hua qing su gan yuan ,hua qing su zuo yong zui ruo 。tong guo liu shi xi bao yi jian ce fa xian ,san chong hua qing su yang pin neng gou yin qi HeLaxi bao zhou ji zai G2/Mji fa sheng zu zhi ,bing ju neng xian zhe tong guo you dao xi bao diao wang lai yi zhi HeLaxi bao de zeng shi 。5、tong guo dan bai zhi mian yi yin ji fen xi ji shu jian ce le HeLaxi bao nei xiang guan dan bai （p53、p38-MAPKhe Caspase-3）de biao da shui ping bian hua 。ji zhong p53dan bai de biao da shui ping tong chang bei yong zuo G2/Mji xi bao zhou ji ting zhi de biao zhi wu ,bing ju p53he p38-MAPKde shang diao yi ji Caspase-3de ji huo shui ming HeLaxi bao ke neng tong guo xian li ti nei de diao wang tu jing yin fa le xi bao diao wang ,cong er yi zhi le HeLaxi bao de zeng shi ,wei jin yi bu chan ming bi nan hua qing su gan yuan ying xiang xi bao zhou ji zu zhi he xi bao diao wang de ke neng ji zhi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自吉林大学的刘彦君，发表于刊物吉林大学2019-06-25论文，是一篇关于吡喃论文,蓝莓论文,花青素论文,花青素苷元论文,细胞论文,吉林大学2019-06-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林大学2019-06-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。