人参粗蛋白提取及酶解产物的研究

论文摘要

针对人参蛋白的提取采用了一种简便和高效的方法,为工业化提取人参皂苷后合理利用废弃产物提供依据。以提取的人参粗蛋白为基础采用可控酶解技术,对酶解过程进行研究,利用正交分析选出最优的提取工艺。采用小分子量凝胶电泳技术研究酶解后产物的分子量分布并且对酶解后产物的生物活性进行了简单讨论。最后讨论了吉林省人参产业在现阶段发展的主要问题和解决问题的方法。主要研究结果如下：1.人参粗蛋白的提取。利用D-101型大孔树脂和001×7阳离子交换树脂的组合提取人参粗蛋白,经过测算在大孔树脂有效的吸收范围内添加大孔树脂量,如果增加会对人参粗蛋白的提取有明显影响,在有效范围内不会影响人参皂苷的提取还可以有效提取人参粗蛋白。2.采用单因素和正交实验的结合讨论人参粗蛋白酶解工艺的最佳组合。木瓜蛋白酶最佳酶解工艺条件是温度为55℃、pH值为7、酶用量为4%、时间为4h。中性蛋白酶最佳酶解工艺条件是温度为55℃、pH值为6、酶用量为4%、时间为3h。3.小分子量凝胶电泳显示：提取的人参粗蛋白分子量集中在71kDa-50kDa和35kDa-25kDa之间,在35kDa-25kDa中人参蛋白含量丰富。经过酶解后集中在71kDa-50kDa之间的条带消失,35kDa-25kDa之间的蛋白含量也有所减少,转而下移到16kDa以下,这表明人参蛋白有明显的酶解现象,并且产生小分子量的多肽和氨基酸的混合物。4.通过对酶解产物的活性研究表明：人参粗蛋白的酶解产物对自由基的清除、抑菌、和功能性氨基酸含量等方面有着相关活性。中性蛋白酶酶解产物（10mg/ml）对DPPH自由基的清除率达到92.50%,木瓜蛋白酶酶解产物（10mg/ml）对DPPH自由基的清除率达到89.91%。清除羟自由基方面,中性蛋白酶酶解产物（10mg/ml）对羟自由基的清除率达到83.17%,木瓜蛋白酶酶解产物（10mg/ml）对羟自由基的清除率达到87.61%。抑菌方面10mg/ml的木瓜蛋白酶酶解产物的抑菌率达到40.248%,而中性蛋白酶在高浓度时抑菌效果表现不好,但在低浓度时（2.5mg/ml）时抑菌率达到24.319%。Y-氨基丁酸（GABA）含量方面,人参粗蛋白的含量为7.8%,随着酶解过程逐渐的深入GABA含量有所增加,中性蛋白酶的酶解产物GABA含量为8.1%,木瓜蛋白酶的酶解产物GABA含量为8.3%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 人参概述
• 1.2 小分子活性肽
• 1.3 人参蛋白
• 1.4 蛋白质改性
• 1.5 自由基与抗氧化剂
• 1.5.1 抗氧化剂的种类
• 1.5.2 抗氧化剂的来源
• 1.6 研究的目的与意义
• 第二章 人参粗蛋白提取研究
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与试剂
• 2.2 仪器与设备
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 标准曲线的绘制
• 2.3.2 D-101大孔树脂对人参粗蛋白吸附影响的测定方法
• 2.3.3 人参粗蛋白提取的方法
• 2.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的制备
• 2.4.1 储备液配置
• 2.4.2 制胶灌胶
• 2.4.3 样品制备
• 2.4.4 加样
• 2.4.5 电泳
• 2.4.6 染色脱色
• 2.5 结果与分析
• 2.5.1 标准曲线的绘制
• 2.5.2 人参样品中蛋白含量和皂苷含量的分析结果
• 2.5.3 不同大孔树脂的填充量对人参粗蛋白和皂苷的影响
• 2.5.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析
• 2.6 讨论
• 第三章 人参粗蛋白酶解工艺研究
• 3.1 研究目的
• 3.2 材料与方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 蛋白酶的活性测定及其选择
• 3.3.2 单酶筛选实验
• 3.3.3 单酶水解实验
• 第四章 人参粗蛋白酶解产物TRICINE-SDS-PAGE方法研究
• 4.1 试验材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 试验结果与分析
• 4.2.1 常规凝胶电泳12%分离胶浓度电泳分析图4-1
• 4.2.2 常规凝胶电泳15%分离胶浓度电泳分析图4-2
• 4.2.3 丙烯酰胺溶液的配比组合1电泳分析图4-3
• 4.2.4 丙烯酰胺溶液的配比组合2电泳分析图4-4
• 4.2.5 丙烯酰胺溶液的配比组合3电泳分析图4-5
• 4.2.6 丙烯酰胺溶液的配比组合4电泳分析图4-6
• 4.2.7 最佳酶解工艺的人参蛋白酶解产物电泳分析
• 4.3 讨论
• 第五章 人参多肽抗氧化功能、抑菌活性及Γ-氨基丁酸含量研究
• 5.1 试验材料与试剂
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 实验试剂
• 5.1.3 供试菌种
• 5.1.4 仪器设备
• 5.1.5 实验用阳性药
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 清除DPPH自由基活性的测定
• 2-脱氧核糖法'>5.2.2 ·OH清除能力测定:D₂-脱氧核糖法
• 5.2.3 自由基清除率测试样品溶液的配置
• 5.2.4 抑菌实验测试样品溶液的配置
• 5.2.5 阳性药的配制
• 5.2.6 培养基的配置
• 5.2.7 抑菌实验步骤
• 5.2.8 结果计算
• 5.2.9 GABA标准溶液的配置与标准曲线的绘制
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 清除DPPH自由基活性
• 5.3.2 清除·OH能力的活性
• 5.3.3. 阳性药的筛选
• 5.3.4 抑菌实验结果
• 5.3.5 GABA含量的确定
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 论文发表情况