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RNAi沉默survivin基因对胃癌及白血病细胞生长的抑制作用

2020-11-23阅读(406)

RNAi沉默survivin基因对胃癌及白血病细胞生长的抑制作用

论文摘要

本实验的目的:探讨Survivin在胃癌组织中的表达及意义。应用RNAi技术沉默Survivin基因观察其抗肿瘤作用。方法:1.应用免疫组织化学方法检测54例胃癌及27例癌旁组织和10例正常胃粘膜组织Survivin蛋白表达,并结合临床指标、预后进行分析;2.针对Survivin mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建两对pGCsilencer U6/GFP/Survivin siRNA重组质粒,转染人胃癌细胞SGC-7901和人白血病细胞K562,进行体外研究。结果:1.癌旁组织与癌组织中Survivin高表达,正常胃粘膜不表达,Survivin表达与性别、年龄、淋巴结转移、临床分期均无关（P>0.05）,而与肿瘤分化程度及生存预后有关;2.成功构建pGCsilencer U6/GFP/Survivin siRNAs重组质粒,并成功转染人胃癌细胞及白血病细胞;3.Western blot,RT-PCR结果证实重组质粒在蛋白及mRNA水平分别显著抑制survivin基因表达;4.MTT及流式细胞仪结果证明上述重组质粒可显著抑制胃癌细胞及白血病细胞的体外生长,并诱导其凋亡。结论:RNAi技术沉默Survivin显示出了明显的抗胃癌及白血病作用。本研究首次将Survivin的临床研究与基础研究结合起来,首次应用RNAi技术沉默Survivin基因在胃癌细胞SGC-7901和人白血病细胞K562内的表达,并诱导肿瘤细胞凋亡。具有较高的应用价值,为肿瘤的基因治疗提供理论和实践依据。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 Survivin 研究进展
  • 一、Survivin 的结构
  • 二、Survivin 的分布
  • 三、Survivin 与细胞凋亡
  • 四、Survivin 表达的调节机制
  • 五、Survivin 与血管形成
  • 六、Survivin 与癌基因的关系
  • 七、Survivin 在肿瘤中的应用
  • 八、总结
  • 第二章 RNA 干扰研究进展
  • 一、RNA 干扰现象
  • 二、RNA 干扰作用机制
  • 三、RNAi 的特点
  • 四、siRNA 的制备
  • 五、影响RNAi 效率的因素
  • 六、RNA 干扰技术的应用
  • 第二篇 siRNA survivin表达载体的构建及其对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响
  • 第一章 材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、主要仪器
  • 二、主要试剂
  • 三、质粒
  • 四、抗体
  • 五、菌株
  • 六、细胞
  • 第二节 实验原理及方法
  • 一、pGCsilencerU6/GFP/Survivin siRNA重组质粒的构建
  • 二、细胞培养及重组质粒的转染
  • 三、细胞生长抑制试验-MTT法
  • 四、凋亡细胞的检测
  • 五、Survivin蛋白水平检测—Western 印迹分析
  • 六、Survivin mRNA的RT-PCR检测
  • 第三节 统计学处理
  • 第二章 实验结果
  • 一、成功构建pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA 重组质粒
  • 二、pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA抑制SGC-7901 细胞的生长
  • 三、重组质粒诱导SGC-7901细胞凋亡
  • 1. 流式细胞仪检测到SGC-7901细胞凋亡峰
  • 2. 丫啶橙染色凋亡细胞
  • 四、重组质粒特异性抑制Survivin 在SGC-7901细胞中的表达
  • 1. Survivin 蛋白分析
  • 2. Survivin mRNA分析
  • 第三篇 RNAi 沉默survivin基因对白血病细胞系K562生长的抑制作用
  • 第一章 实验材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、主要仪器
  • 二、主要试剂
  • 三、质粒
  • 四、抗体
  • 五、菌株
  • 六、细胞
  • 第二节 实验方法
  • 一、PGCsilencerU6/GFP/survivinsiRNA 重组质粒的构建与鉴定
  • 二、细胞培养及重组质粒的转染
  • 三、流式细胞仪检测细胞凋亡
  • 四、Survivin 蛋白水平检测—Western 印迹分析
  • 五、Survivin mRNA的RT-PCR检测
  • 六、细胞生长抑制试验-MTT法
  • 第三节 统计学处理
  • 第二章 实验结果
  • 一、pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA转染对K562细胞的生长抑制作用
  • 二、pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA对K562细胞凋亡的影响
  • 三、重组质粒特异性抑制Survivin 在K562 细胞中的表达
  • 1. Survivin 蛋白分析
  • 2. Survivin mRNA分析
  • 第四篇 Survivin 在胃癌组织中的表达及临床意义
  • 第一章 实验材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、实验标本
  • 二、试剂
  • 三、主要仪器
  • 四、细胞
  • 第二节 实验原理及方法
  • 一、胃癌组织的Survivin 免疫组织化学染色
  • 二、SGC-7901 免疫细胞化学染色
  • 第三节 结果处理及统计
  • 第二章 实验结果
  • 一、随访
  • 二、阳性片的判定
  • 三、Survivin 表达与预后的关系
  • 第五篇 讨论
  • 第六篇 结论
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 攻读博士学位期间发表论文
  • 致 谢

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