幽门螺杆菌卵黄抗体的研制

论文摘要

试验以幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）为材料，采用不同培养基进行培养和保存，并制备成完全抗原对刚开产或开产不久的母鸡进行免疫，用凝集试验法测定其抗体效价，并对免疫Hp母鸡免疫应答规律和卵黄抗体的抑菌活性及理化特性做了初步探讨。为制备高含量的抗Up的免疫卵黄及相关生物的制剂提供技术依据，也为鸡蛋及免疫蛋的开发利用和深入研究积累经验并提供借鉴。 1 幽门螺杆菌的培养与保存 本试验采用不同培养基对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）进行培养和保存，结果表明：固体培养Hp，培养基为哥伦比亚琼脂基础加混合抗生素(10mg·L-1盐酸万古霉素+10mg·L-1两性霉素B+2500iu·L-1多粘菌素B+5mg·L-1甲氧苄胺嘧啶)，并分别添加6％脱纤维绵羊血、6％马血清，在5％O2，10％CO2，85％N2的微需氧条件下，37℃培养3d，均可培养出Hp；严格无菌的条件下，不添加混合抗生素，对细菌的生长没有影响，且不会造成杂菌污染。液体培养Hp，布氏肉汤基础中加入混合抗生素和6％马血清，Hp增菌迅速，但如不及时更换新鲜的微需氧环境，极易形成球形体。菌株采取冷冻保存液法保存于-70℃～-80℃低温条件下6个月，可以成功复苏，且复苏率可达100％。 2 抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验 试验以幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免，165日龄二免，180日龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，采用凝集试验法测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15天，采取两次加强免疫方法，可有效的引起免疫应答。母鸡在初免45d后，抗体效价可达到1:1024，同批样品在此水平可维持达60d以上（效价大于1:128），然后抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1:8。体外抑菌试验表明，高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。 3 鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性 试验对自制鸡抗幽门螺杆菌高免卵黄的理化特性进行了研究。结果发现：pH值、温度对其活性的影响较明显，胃蛋白酶则加强了这一作用。在pH值单独影响下，pH≤3为其敏感区，如果同时存在胃蛋白酶，则其敏感区为pH≤4，在巴氏消毒温度条件下其具有较好的热稳定性，这对于工业化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献综述
• 第一章 幽门螺杆菌的治疗现状及其进展
• 1 化学药品对 Hp感染的治疗及其现状
• 2 中药对 Hp感染治疗的研究现状
• 3 免疫防治
• 参考文献
• 第二章 免疫鸡卵黄抗体研究进展
• 1 卵黄抗体的形成
• 2 IgY的性质
• 3 IgY的作用机理
• 4 IgY分离
• 5 IgY提取
• 6 IgY纯化
• 7 影响IgY产生的主要因素
• 8 IgY在动物疾病防治方面的应用
• 9 IgY开发前景
• 参考文献
• 试验研究
• 第三章 幽门螺杆菌的培养与保存
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 第四章 抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 第五章 鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间已发表的论文目录