论文题目: 同源重组技术在酿酒酵母表达载体构建中的应用
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 陈向岭
导师: 李育阳
关键词: 酿酒酵母,表达系统,同源重组,附加体型载体,质粒稳定性,质粒拷贝数,融合蛋白
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 酿酒酵母系统是最重要的外源基因表达系统之一。带有完整2μ质粒序列的酿酒酵母附加体型载体已被用于多种医药产品基因工程表达载体的构建。但是,现有载体在细胞中的稳定性还不够理想;载体中含有包括抗药性基因在内的大肠杆菌质粒序列,不符合生物安全要求;另外,在构建载体时由于依赖限制性核酸内切酶,所以步骤比较繁琐。为了更好利用酿酒酵母表达系统,有必要进一步研究克服上述缺陷。 酿酒酵母存在高效的同源重组机制,两个DNA分子间只要有30-50bp长的同源区段就可以准确、有效地进行同源重组。本论文旨在利用同源重组技术构建两类新型酿酒酵母表达载体——不含大肠杆菌质粒序列、稳定性高的pHR系列表达载体和适合小分子多肽与人超氧化物歧化酶融合表达的载体pRSODF。 为了构建不含大肠杆菌抗药性质粒序列,具有高稳定性的pHR系列表达载体,我们先在载体pHC11的基础上构建了载体pHC11R,然后以人α2b干扰素基因和乙肝病毒融合抗原基因SA28为试验基因,通过PCR扩增这两个基因的表达单元,并在它的两端引入同源重组所需的序列,将它们分别与pHC11R去除大肠杆菌质粒序列的DNA片段共转化酿酒酵母DCO4,得到表达人α2b干扰素和表达乙肝病毒融合抗原SA28的工程菌:DCO4/pHC11R-IFNα2b和DCO4/pHC11R-SA28。表达载体pHC11R-IFNα2b和pHC11R-SA28与相应含有大肠杆菌质粒序列的表达载体pHC11-IFNα2b和pHC11-SA28相比,载体明显缩小、载体在宿主中的稳定性和拷贝数显著提高、外源基因的表达量也获得了明显提高。为了使构建的载体能适应不同类型的外源基因的表达需要,进一步构建了pHR系列载体。利用pHR系列载体,任何外源基因经PCR扩增,在其两端加上
论文目录:
摘要
Abstract
前言
第一部分 利用同源重组构建去除大肠杆菌质粒部分的新型酿酒酵母表达载体
摘要
引言
材料和方法
结果
讨论
小结
第二部分 利用同源重组构建人超氧化物歧化酶融合蛋白表达载体
摘要
引言
材料和方法
结果
讨论
小结
参考文献
综述
致谢
在校期间研究成果
论文独创性声明
发布时间: 2005-09-19
相关论文
- [1].毕赤酵母表达系统及其应用[D]. 郭雨刚.中国科学技术大学2012
- [2].酿酒酵母遗传操作方法研究及乙醇发酵高产菌株构建[D]. 侯丽华.天津大学2009
- [3].食品级酿酒酵母高效分泌/展示表达系统构建[D]. 郭钦.浙江大学2009
- [4].采用同源重组技术构建PrA低表达且能分泌LTP1的酿酒酵母菌株及其性能研究[D]. 张洪波.浙江大学2009
- [5].同源重组技术构建蛋白酶A低表达且能产β-葡聚糖酶的酿酒母菌株及其性能研究[D]. 张强.浙江大学2008
- [6].利用淀粉的酿酒酵母工程菌的构建[D]. 刘增然.四川大学2004
- [7].木酮糖激酶对酿酒酵母代谢工程菌木糖利用的影响及木糖异构酶基因的胞外表达[D]. 沈煜.山东大学2005
- [8].木糖代谢关键酶基因克隆及重组酵母菌株构建[D]. 徐勇.南京林业大学2005
- [9].基质利用和酒精发酵性能改善的重组酿酒酵母[D]. 张梁.江南大学2005
- [10].酒酒球菌mleA和mleP基因的克隆及其在酿酒酵母中的转化与表达[D]. 刘延琳.西北农林科技大学2004
标签：酿酒酵母论文; 表达系统论文; 同源重组论文; 附加体型载体论文; 质粒稳定性论文; 质粒拷贝数论文; 融合蛋白论文;