降胆固醇益生菌的研究

论文摘要

近年来心脑血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势,在我国心脑血管疾病死亡率已位居第一位,严重威胁人们的身体健康。心脑血管疾病主要是由高血脂症引发的动脉硬化引起的。化学药物治疗心脑血管疾病费用高、毒副作用大,且主要以治疗为主,不能起到良好的预防作用。为找到一种更安全、毒副作用小且经济的降胆固醇制品,许多科学家对益生菌的降胆固醇作用进行了研究。在我国益生菌降胆固醇的研究还处于起步阶段,筛选出具有高效降胆固醇功能的益生菌并对其功能性、安全性、作用机理和动物体内作用效果进行验证使其能够作为具有降胆固醇功能的益生菌制品的候选菌株具有重要的意义。本课题研究的结果：1从长寿地区采集的多种发酵食品中例如辣白菜、泡菜、酸奶、奶酪、腐乳等,利用碳酸钙透明圈法和指示剂法初步筛选出19株具有较强降胆固醇功能的菌株作为筛选菌株。用硫酸铁铵法将这19株筛选菌株进行体外降胆固醇功能的测定,得到8株降解率在55%以上的菌株作为候选菌株。2测定候选菌株在模拟胃肠道环境下的存活情况和对细胞的粘附性,结果表明DM9007、DM9054、DM9073三株菌在模拟胃肠道环境实验中能保持较高的活菌数,并且对细胞也有较好的粘附能力,将其作为后期实验菌株。3研究三株实验菌株对6种常见致病菌的抑制生长能力,结果表明三株实验菌株具有一定程度的抑制有害菌的生长的能力。同时也对三株实验菌株进行抗生素类药物敏感性测定,菌株总体对抗生素类药物较稳定,仅对糖肽类和喹诺酮类药物具有耐药性。4对三株实验菌株进行降胆固醇能力的优化,DM9007、DM9054、DM9073胆固醇降解率分别升高了2.60%、8.27%和2.78%,胆固醇的降解率最终分别达到58.24%、66.48%和60.99%。5将各方面性状较好的菌株DM9054作为优选菌株,对其进行菌种鉴定,分别从形态学方面、生物化学方面和分子生物学方面对菌株进行鉴定,结果表明菌株为鼠李糖乳杆菌。6对优选菌株DM9054进行安全性检验,以昆明小鼠为实验对象,检测菌株对小鼠的急性毒性和肝肠易位现象。实验过程中小鼠未出现死亡和肝肠易位现象,表明菌株安全性较好,未为对小鼠造成明显毒副作用。7对优选菌株DM9054进行动物实验,从菌株对高血脂症的预防方面和治疗方面检测菌株的降胆固醇作用。结果表明菌株对小鼠各个血清指标和脏器指数均具有较好的恢复作用,预防方面血清胆固醇和肝脏胆固醇降解率分别达到48.01%和64.30%；治疗方面血清胆固醇和肝脏胆固醇降解率分别达到61.34%和68.82%。8对DM9007、DM9054、DM9073三株具有较强体外将胆固醇能力的菌株进行降解机理研究,结果发现共沉淀作用、吸收作用和其他降胆固醇机理在三株菌降胆固醇作用中占据不同比例。DM9007、DM9054、DM9073共沉淀作用占的比例分别为28.59%、40.98%和42.07%；吸收作用占的比例分别为22.50%、20.33%和15.98%。通过一系列的实验得到一株降胆固醇能力较强、性状优良、安全性高的菌株,为其后期开发出具有降胆固醇功能益生菌制品提供了潜力菌株、奠定了实验基础。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 第1章 绪论
• 1.1 胆固醇与人体健康
• 1.1.1 胆固醇的代谢与健康
• 1.1.2 防治高血脂症的主要方法
• 1.2 益生菌降胆固醇的研究
• 1.2.1 益生菌降胆固醇的机理
• 1.2.2 益生菌降胆固醇的研究现状
• 1.3 课题研究意义及实验方案
• 1.3.1 研究意义
• 1.3.2 实验方案
• 第2章 具有降胆固醇功能益生菌的筛选
• 2.1 前言
• 2.2 实验材料及仪器设备
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 仪器设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 培养基及试剂的配制
• 2.3.2 具有降胆固醇能力菌株的初步筛选
• 2.3.3 菌株体外降胆固醇能力的测定
• 2.3.4 菌株模拟胃肠道环境的筛选
• 2.3.5 菌株粘附能力测定
• 2.3.6 菌株抑菌耐药能力的测定
• 2.3.7 菌株的定向驯化
• 2.4 实验结果与分析
• 2.4.1 具有降胆固醇能力菌株的初步筛选结果
• 2.4.2 菌株体外降胆固醇能力的测定结果
• 2.4.3 菌株模拟胃肠道环境筛选的结果
• 2.4.4 菌株对结肠癌细胞HT-29细胞粘附能力的测定结果
• 2.4.5 实验菌株对致病菌的抑制作用测定结果
• 2.4.6 实验菌株对抗生素类药物耐受性结果
• 2.4.7 菌株的定向驯化结果
• 2.5 本章小结
• 第3章 菌株的鉴定
• 3.1 前言
• 3.2 实验材料及仪器设备
• 3.2.1 实验材料
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 形态学鉴定
• 3.3.2 基本生物化学鉴定
• 3.3.3 分子生物学鉴定
• 3.4 实验结果与分析
• 3.4.1 形态学鉴定
• 3.4.2 基本生物化学鉴定结果
• 3.4.3 分子生物学鉴定结果
• 3.5 本章小结
• 第4章 菌株的初步安全性评价
• 4.1 前言
• 4.2 实验材料及仪器设备
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 仪器设备
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 菌株的急性毒性研究
• 4.3.2 菌株肝肠易位研究
• 4.4 实验结果与分析
• 4.4.1 菌株急性毒性研究结果
• 4.4.2 菌株肝肠易位研究结果
• 4.5 本章小结
• 第5章 菌株对胆固醇降解功能的体内相关性研究
• 5.1 前言
• 5.2 实验材料及仪器设备
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 仪器设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 高脂饲料的配制
• 5.3.2 菌液的制备
• 5.3.4 实验内容
• 5.3.5 实验样本的采集于指标的测定
• 5.4 实验结果与分析
• 5.4.1 小鼠高血脂模型的建立
• 5.4.2 灌胃菌体对小鼠体重及脏器比例的影响
• 5.4.3 灌胃菌体对小鼠血清胆固醇的影响
• 5.4.4 灌胃菌体对小鼠血清甘油三酯的影响
• 5.4.5 灌胃菌体对小鼠血清高密度脂蛋白含量的影响
• 5.4.6 灌胃菌体对小鼠肝脏胆固醇的影响
• 5.4.7 灌胃菌体对小鼠粪便胆酸的影响
• 5.5 本章小结
• 第6章 菌株对胆固醇降解机理的研究
• 6.1 前言
• 6.2 实验材料及仪器设备
• 6.2.1 实验材料
• 6.3 实验方法
• 6.3.1 实验菌液的制备
• 6.3.2 菌株对胆固醇的吸收作用和共沉淀作用的研究
• 6.3.3 菌株的细胞膜和细胞壁对胆固醇的吸收作用
• 6.3.4 菌株产胆酸能力的测定
• 6.4 实验结果与分析
• 6.4.1 菌株对胆固醇的吸收作用和共沉淀作用的研究结果
• 6.4.2 菌株的细胞膜和细胞壁对胆固醇的吸收作用
• 6.4.3 菌株产胆酸能力的测定
• 6.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文