SPARC在胰腺癌中的作用及其增加化疗敏感性的机制

论文摘要

胰腺导管腺癌是全世界范围最恶性的肿瘤之一。虽然近年在治疗上有了较大的进步,但其总的五年生存率仍很低。这个结果促使对胰腺癌发生发展的相关机制进一步研究显得十分必要。过去肿瘤的研究主要集中于恶性肿瘤本身的分子遗传学及细胞自身的行为。现在对肿瘤的研究集中于肿瘤细胞与其微环境的相互作用。在肿瘤发展的每个阶段,肿瘤细胞都与其微环境相互联系,其中细胞外基质蛋白在肿瘤与其微环境中的相互作用中有重要作用。本研究中的SPARC （Secreted protein acidic and rich in cysteine）蛋白就是一个典型的基质蛋白。在一些肿瘤中如黑色素瘤、胃癌,其可以促肿瘤的增殖、转移；而在另外的肿瘤中如结肠癌、肝癌、卵巢癌中,其可以抑制肿瘤的进展。在胰腺癌中已发现SPARC异常表达,并且其被认为其与肿瘤发生发展相关,但其作用机制仍不明。在本研究中,我们将进一步探索SPARC在胰腺癌生长中的作用及其机制。首先我们在胰腺癌标本和胰腺癌细胞中检测是否有SPARC的表达,然后分别在MIA PaCa2和PANC-1胰腺癌细胞中过表达和下调SPARC的表达,检测对细胞行为是否有影响,并且在体外和动物模型中检测SPARC对于胰腺肿瘤细胞生长的影响。结果显示在胰腺癌病人的组织标本中,SPARC高表达,其染色阳性主要位于癌周围成纤维细胞,恶性肿瘤上皮表达缺失。基质中SPARC高表达与病人不良预后相关。在体外和动物模型中,在MIA PaCa2细胞中过表达SPARC抑制肿瘤细胞生长及活体内成瘤能力；相反在PANC-1细胞中下调SPARC促进肿瘤的生长及活体内成瘤能力。进一步的研究发现这个生长抑制作用与SPARC上调p53,p27kip1从而导致G0/G1期细胞阻滞有关。p53, p27kip1最终都可以抑制Rb蛋白的磷酸化,导致细胞周期阻滞；干扰p53蛋白作用后,部分回复了SPARC对于胰腺癌细胞生长抑制的作用。我们的结果显示,SPARC可以通过抑制细胞周期,从而抑制细胞生长并且可能是对胰腺癌的治疗一个潜在靶点。在进展期胰腺癌中,化疗耐药性是主要的致死原因之一。有研究显示在对治疗效果不佳的结直肠癌,SPARC可以通过诱导凋亡,提高化疗耐药,从而提高治疗中对于化疗的敏感性。而尚未有报道：在胰腺癌中SPARC是否也有相同的作用。本研究通过采用5-FU处理过表达SPARC或不表达SPARC的MIA PaCa2细胞,检测各组细胞的增殖,细胞周期和凋亡。我们的结果显示,与对照细胞相比,用5-FU处理后,过表达SPARC的细胞显示了SPARC/5-FU对生长抑制,细胞周期和凋亡诱导的协同作用。蛋白检测显示,与对照组相比,过表达SPARC的细胞中凋亡相关蛋白caspase2,8,9及caspase3的底物,剪切的PARP的表达都明显增加。裸鼠肿瘤皮下接种治疗模型也同样观察到了SPARC/5-FU对于肿瘤生长抑制的协同作用。这个结果初步解释了SPARC/5-FU提高化疗敏感性的机制,并且SPARC/5-FU联合有可能成为今后可以应用于晚期或进展期胰腺癌病人对化疗耐药的治疗

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 人SPARC基因的克隆与表达载体及siRNA载体的构建
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 SPARC在胰腺癌细胞中的作用机制
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 SPARC增加胰腺癌细胞化疗敏感性的机制
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 在读期间已发表和待发表的论文
• 致谢