论文摘要
河豚毒素（TTX）,分子式C11H17N3O8,相对分子量319.1016,是非蛋白、高活性、低分子量的神经毒素,比氰化钠的毒性大1000倍,主要存在于河豚鱼类的卵巢、睾丸、卵、肝、脾、眼球和血液内。1909年,日本学者从豚属鱼卵内提取到一种粗品毒素,命名为河豚毒素（Tetrodotoxin, TTX）。TTX具有镇痛、局麻、降压等多方面药理作用,尤其对多种钝痛及锐痛有明显的缓解作用。临床上,TTX针剂可代替吗啡、阿托品、杜冷丁和南美筒箭毒。在这些背景下,寻找科学、准确的TTX质检方法和血浆中TTX的检测方法就尤为重要。1、对河豚毒素的质量分析方法进行研究。首先,建立了河豚鱼肝和子中河豚毒素（TTX）的亲水液相色谱-三重四极杆质谱联用（LC-MS/MS）的定量检测方法。样品经过匀浆,超声,乙腈沉淀离心。色谱柱为极性聚酰胺键合硅胶柱Innovation HP Amide column（100×3.0 mm, 5 μm）,流动相为乙腈-0.3%甲酸（70：30,V/V）。以正离子多反应监测（MRM）方式进行定量分析,用于监测的离子对为m/z 320.1→162.1。TTX的线性范围为0.0313-2.00μg·mL-1,r= 0.9999;检测限（S/N=3）为0.30 ng·mL-1;加样回收率在95.9%-103.9%之间。该法简单,灵敏度高,重现性好,适用于河豚鱼肝和子中河豚毒素的定量测定。然后,运用快速液相色谱-高分辨质谱联用仪,Peakview软件,对河豚毒素原料药进行纯度检查,包括纯度测定和有关物质研究。河豚毒素原料药的纯度≥99%,并且发现了m/z 482,304,272三种有关物质,并对其结构进行了推测。最后,对河豚毒素软胶囊内容物中河豚毒素的含量进行了质量控制研究,并建立了相应的含量测定方法,色谱柱为ZORBAX RX-SIL column（4.6×150 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸（60：40,VN）,线性范围为0.0125-0.800 μg·mL-1,加样回收率在95.00%-100.32%之间,方法简单,快速,灵敏度高,适用于河豚毒素的定量测定。2、对河豚毒素在大鼠体内的药代动力学进行研究。建立灵敏的高效液相-串联质谱联用（LC-MS/MS）方法,用于测定大鼠血浆中河豚毒素的含量,并研究河豚毒素在大鼠体内的药代动力学。样品采用液液萃取方法,选择苦参碱为内标。采用ESI源,MRM离子监测模式,TTX和苦参碱的检测离子对分别为m/z 320.1→162.1,m/z 249.1→148.1。单剂量8 μg·kg-1尾静脉注射后,测定大鼠血浆中TTX的浓度,并计算药代动力学参数。血浆中TTX检测的线性范围为0.625-80 ng·mL-1,提取回收率均高于85%。大鼠血浆中TTX的Cmax为（1.874±0.803）μg·L-1, Tmax为（1.305±0.573） h,T1/2为（9.761±4.687）h。该方法可简便、高效的测定大鼠血浆中TTX的浓度,并应用于药代动力学研究。