重症急性胰腺炎SIRS时pMΦ吞噬凋亡PMN功能异常的分子机制及中西医结合治疗

论文摘要

背景和目的:全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）是多种疾病发展至多器官功能不全综合征（multiple organ dysfunction syndro me,MODS）和多器官衰竭（multiple system organ failure,MSOF）的前期表现,是许多疾病恶化的常见原因。急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）是引起SIRS的重要疾病之一。中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils,PMN）是炎症过程中的重要效应细胞,在SIRS的发生、发展和转归中起着关键作用。正常情况下PMN以凋亡的方式被巨噬细胞（macrophage,MΦ）识别、吞噬和清除,凋亡的PMN若不能及时被巨噬细胞吞噬、清除,PMN自发崩解后释放的毒性物质,将会过度介导炎症反应及组织损害,形成恶性循环,从而加重SIRS[8]。因此,凋亡的PMN适时、适度的清除就显得格外重要。mCD14是MΦ识别和吞噬凋亡细胞的主要受体之一[23]。本实验旨在研究在重症急性胰腺炎导致全身炎症反应综合征的大鼠模型中,mCD14mRNA、蛋白表达水平的变化对MΦ吞噬凋亡PMN能力改变的影响,并进一步探讨应用中药茵陈承气汤、地塞米松和两者联合用药的治疗作用及机制。方法:经胆胰管逆行注入1.5%去氧胆酸钠溶液制备大鼠SAP/SIRS（SAP/SIRS）的模型[3]。75只SD大鼠随机分为假手术组（SO）、重症急性胰腺炎SIRS组、茵陈承气汤（YCCQT）组、地塞米松（DEX）组、中西医结合（ZXY）组,茵陈承气汤治疗剂量为1ml/100g（经口注入）,地塞米松治疗剂量为1mg/100g（腹腔内注射）,各治疗组于造模后立即一次（术后2h）和造模后12小时再次给药。24h后采取标本做病理检查和各项指标检测。光镜下观察各组胰腺标本病理改变,进行组织学评分;应用MPO法检测pMΦ的吞噬能力;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组巨噬细胞mCD14mRNA水平的差异;应用免疫细胞化学技术检测各组mCD14蛋白水平的差异。结果:1.各组大鼠光镜下胰腺标本病理改变:与假手术组比较,SAP/SIRS模型组具有显著性病理改变（水肿:3.60±0.22 vs 0.30±0.06、炎症:2.80±0.15 vs 0、出血:2.20±0.18 vs 0、坏死:2.81±0.25 vs 0,P﹤0.01）;与SIRS模型组比较,各治疗组胰腺均具有不同程度的改善,且具有明显差异（P﹤0.05）,其中中西医结合治疗组与模型组比较具有更显著性的差异（水肿:3.10±0.14 vs 3.60±0.22,P﹤0.05、炎症:1.50±0.13 vs 2.80±0.15、出血:0.30±0.06 vs 2.20±0.18、坏死:1.30±0.11 vs 2.81±0.25,P﹤0.01）。2.各组大鼠pMΦ吞噬凋亡PMN能力的比较:（1）与假手术组比较,SAP/SIRS模型组巨噬细胞吞噬能力明显下降,具有显著差异（2.10±0.6 vs 3.6±0.5,P﹤0.01）;（2）与SAP/SIRS模型组比较,中药茵陈承气汤组巨噬细胞吞噬能力明显增加（2.5±0.4 vs 2.10±0.6,P﹤0.05）,地塞米松组巨噬细胞吞噬能力明显增加（2.9±0.3 vs 2.10±0.6,P﹤0.05）,中西医结合治疗组巨噬细胞吞噬能力明显增加（3.0±0.2 vs 2.10±0.6,P﹤0.01）;（3）各治疗组间比较:中西医结合治疗组与中药茵陈承气汤组、地塞米松组比较,巨噬细胞吞噬能力明显增加（3.0±0.2 vs 2.5±0.4 vs 2.9±0.3,P﹤0.05）3.各组大鼠pMΦmCD14mRNA及蛋白表达的比较:（1）与假手术组比较,SAP/SIRS模型组巨噬细胞mCD14的表达有显著性差异（mRNA水平:0.63±0.04 vs 0.80±0.13,P﹤0.01;蛋白水平:16.7% vs 80.0%,P﹤0.05）;（2）与SIRS模型组比较:中药茵陈承气汤组巨噬细胞mCD14的mRNA表达水平有显著性差异（0.63±0.04 vs 0.68±0.09,P﹤0.05）,而蛋白水平无明显差异（16.7% vs 50.0%,P﹥0.05）;地塞米松组巨噬细胞mCD14的mRNA表达水平有显著性差异（0.63±0.04 vs 0.71±0.20,P﹤0.05）,而蛋白水平无明显差异（16.7% vs 62.5%,P﹥0.05）;而中西医结合治疗组巨噬细胞mCD14的表达有显著性差异（mRNA水平:0.63±0.04 vs 0.79±0.21,P﹤0.01;蛋白水平:16.7% vs 75.0%,P﹤0.05）;（3）各治疗组间比较:中西医结合治疗组与地塞米松组、中药茵陈承气汤组比较,巨噬细胞mCD14的mRNA水平表达有显著性差异（0.79±0.21 vs 0.71±0.20,0.79±0.21 vs 0.68±0.09,P﹤0.05）,而蛋白水平无明显差异（75.0% vs 62.5%,75.0% vs 50.0%,P﹥0.05）;地塞米松组与中药茵陈承气汤组比较,巨噬细胞mCD14的表达无显著性差异（mRNA水平:0.71±0.20 vs 0.68±0.09,P﹥0.05;蛋白水平:62.5% vs 50.0%,P﹥0.05）。结论:较假手术组,SAP/SIRS模型组大鼠胰腺病理性改变程度较严重,各治疗组均有不同程度的改善,但中西药联合应用组效果最佳,表明单一用药对大鼠胰腺病理性改变效果不如中西药联合应用显著。在SIRS模型组,巨噬细胞吞噬凋亡PMN的能力较正常明显下降;mCD14的mRNA及蛋白表达水平也有显著性下降,各药物治疗组均有不同程度提高,且中西药联合应用对SIRS组巨噬细胞的吞噬能力及mCD14的mRNA、蛋白表达水平有显著性上调,提示在SAP/SIRS模型中巨噬细胞的胞膜及其内环境可能发生了改变,使巨噬细胞各种功能也受到了相应的损害,尤其是MΦ膜表面的各种受体功能。在炎症环境中mCD14的mRNA、蛋白表达水平的下调,导致MΦ吞噬、清除凋亡PMN的能力也随之下降,致使PMN过度聚集,从而使病情更加恶化。因此,中西药联合治疗可能是遏制SIRS病情发展的有效方法。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• （九） 附图
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢