半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis白细胞介素8免疫调节作用的研究

论文摘要

半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）是我国主要的海水养殖鱼类之一,具有重要的经济价值。它的养殖区主要分布在我国北方,尤其是山东半岛。但是目前对于它的基础免疫学研究非常少,为了深入研究半滑舌鳎的免疫防御机制,我们利用同源克隆的方法得到白细胞介素8（Interleukin 8,IL-8）基因,分析了它的基因表达和生物活性。白细胞介素8是哺乳动物中参与炎症反应的趋化因子,属于CXC家族,所以也称其为CXCL8。本文通过同源克隆获得了半滑舌鳎IL-8（CsIL-8）基因的全长序列,并对其进行了鉴定分析。CsIL-8包括100个氨基酸残基,在同源性上和鱼类谱系1的IL-8更为接近。它含有CXC趋化因子结构域,其中包括4个保守的半胱氨酸残基,其中的两个半胱氨酸组成特征明显的CXC结构。利用实时荧光定量PCR对该基因的组织表达特征进行了分析,在正常生理条件下发现CsIL-8在各个组织均有表达,细菌刺激和亚单位疫苗免疫后CsIL-8的表达上调。纯化的重组蛋白rCsIL-8能够诱导半滑舌鳎?外周血白细胞和头肾淋巴细胞的迁移并且刺激这些细胞的增殖；当rCsIL-8加入到头肾淋巴细胞培养液中时,随着孵育时间的延长,rCsIL-8能够不同程度地上调IL-1β和IL-8的表达。这些研究结果说明CsIL-8是一个具有免疫调节活性的CXC趋化因子,能够参与病原菌刺激引起的炎症反应应答过程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 1 鱼类的免疫系统
• 1.1 免疫组织和器官
• 1.2 免疫细胞
• 1.3 免疫因子
• 2 鱼类几种重要的细胞因子
• 2.1 细胞因子的概念
• 2.2 白细胞介素
• 2.3 肿瘤坏死因子
• 2.4 干扰素
• 3 趋化因子
• 3.1 趋化性细胞因子的概念
• 3.2 趋化因子结构与分类
• 4 白细胞介素8
• 4.1 IL-8概述
• 4.2 IL-8生物学活性
• 5 半滑舌鳎简介
• 6 本文研究目的、意义
• 第二章 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 2.1 构建cDNA文库
• 2.2 序列分析
• 2.3 克隆CsIL-8基因
• 2.4 表达载体的构建
• 2.5 CsIL-8基因在大肠杆菌中的表达
• 2.6 趋化活性
• 2.7 细胞增殖实验
• 2.8 Real-Time PCR分析头肾淋巴细胞中CsIL-8和IL-1β的表达
• 2.9 Real-Time PCR检测不同状态下CsIL-8的表达
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 CsIL-8的克隆和序列分析
• 3.2 rCsIL-8活性检测
• 3.3 rCsIL-8对细胞增殖的影响
• 3.4 rCsIL-8对头肾淋巴细胞刺激后CsIL-8和IL-1β的表达
• 3.5 Real-Time PCR检测不同状态下CsIL-8的表达
• 讨论
• 结论
• 缓冲液配方
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文
• 致谢