论文摘要
目的:本实验以急性早幼粒白血病细胞HL-60为研究对象,探讨雷帕霉素对HL-60细胞促进凋亡的作用及其分子机制。方法:用MTT比色法测定雷帕霉素对HL-60细胞增殖的影响;用倒置显微镜和荧光显微镜观测细胞凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳观测凋亡的梯形条带;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western-blot检测HL-60细胞经雷帕霉素处理后,Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:雷帕霉素呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的生长,且雷帕霉素80nmol/L与全反式维甲酸10nmol/L的抑制效果相当。雷帕霉素处理72小时的HL-60细胞,经光镜、AO/EB荧光显微镜观察发现细胞体积缩小、核固缩等典型的细胞凋亡形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳观测到:当雷帕霉素浓度40 nmol/L时,隐约可见DNA梯形条带,浓度增至80nmol/L时,DNA梯形条带清晰。但浓度升至160 nmol/L时,不仅仅有DNA梯形条带,而且还出现了膜状的细胞死亡条带;流式细胞仪检测到雷帕霉素80nmol/L对HL-60细胞有诱导凋亡的作用,且随着药物浓度的增加,凋亡率将不再增加。雷帕霉素80nmol/L只有作用到72小时时才出现明显的细胞凋亡。Western-blot检测结果:随着时间的延长,凋亡蛋白Bax表达增加、Bcl-2表达下降,Bax/Bcl-2比值上调。结论:雷帕霉素具有浓度和时间依赖性抑制白血病细胞HL-60增殖。雷帕霉素具有促进HL-60细胞凋亡作用,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值的上调有关。