论文摘要
目的:导师黄世林教授从军从医60余年,他埋首岐黄,勤求故训,不断地继承发扬,博采众长,至今中西合璧,学养精深,在中医、中西医药结合治疗血液系统疾病等方面造诣颇深。他提出以“驱邪复正”为治则治疗急性白血病,率先在临床中应用纯中药补骨脂（psoralea fruits）提取物补骨脂素（psoralen,PSO）加长波紫外线（long wave ultraviolet A,UVA）,又称PUVA,体外净化骨髓,采用自体骨髓移植（autologous bone marrow transplantation,ABMT）治疗急性粒细胞白血病（acute granulocytic leukemia,AGL）。本研究的目的在于全面总结临床疗效、系统整理老师可贵的临床经验,并探讨PUVA法抗白血病的部分作用机制。方法:临床研究分析1991年10月至2005年11月于我单位接受PUVA体外净化ABMT的28例AGL病例的临床资料。实验研究选择人类白血病HL-60、NB4和K562细胞为研究对象,Affymetrix Human U133 2.0基因表达谱芯片检测PUVA对人白血病细胞基因表达的影响;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）测定PUVA后24小时细胞线粒体膜电位水平的变化、细胞Fas、FasL蛋白表达情况;荧光定量RT-PCR技术检测PUVA后4小时细胞Fas、FasL mRNA的表达;免疫细胞化学法（immunocytochemistry,ICC）检测Caspase8、Caspase3蛋白的表达情况。应用SPSS11.5软件进行数据的统计分析。结果:1、28例患者净化前后骨髓单个核细胞中位数分别为8.65×109和9.93×109个（p=0.418＞0.05）。其中25例净化前后骨髓单个核细胞中CD34+细胞中位百分数分别为1.96%和1.77%（p=0.543＞0.05）。2、28例患者有27例获得造血重建,中性粒细胞恢复至＞0.5×109/L的中位时间为+13天;血小板恢复至≥40×109/L的中位时间为+16天。3、在预处理过程中,28例患者均有不同程度的胃肠道反应,其中11例患者出现呕吐;在ABMT恢复过程中,3例患者合并感染而出现发热,2例合并出血。4、28例患者中有8例在ABMT后中位时间7个月复发,总复发率为28.57%,1年复发概率为22.22%,2、3、5、7、10年复发概率均为29.63%。5、随访中位时间52.5月,28例患者平均生存期为143.75±15.63月,95%可信区间为（113.11,174.39）;实际1年生存率为82.14%,2年生存率为75%,3、5、7、10年生存率均为71.43%;1年生存概率为81.74%,2年生存概率为73.22%,3、5、7、10年生存概率均为71.43%。6、基因芯片结果示,PUVA抗白血病的作用主要涉及与细胞凋亡有关的蛋白代谢、蛋白质结构的折叠与修饰以及细胞表面受体介导的信号转导途径,细胞体现出凋亡及其相关功能基因的激活。7、FCM结果示PUVA作用后24小时HL-60、NB4和K562细胞线粒体膜电位水平、FasL蛋白表达明显下降,Fas蛋白表达明显升高。8、荧光定量PCR检测结果示PUVA作用后4小时Fas mRNA表达升高,FasLmRNA表达下降。9、ICC检测结果示PUVA可促进细胞Caspase8、Caspase3蛋白表达。结论:1、依据PSO的光敏特性及PUVA的抗白血病活性,在国内外率先将PSO应用于ABMT临床治疗AGL,具有创新性。2、PUVA体外净化ABMT治疗AGL,对骨髓正常造血细胞损伤较小,可降低复发率,延长无病生存期。3、PUVA可激活白血病细胞凋亡及与其相关功能基因。4、PUVA诱导白血病细胞凋亡的途径之一是作用于Fas/FasL系统,激活下游的Caspase-8、3,线粒体跨膜电位参与了凋亡的过程。