PDX-1蛋白对细胞因子和棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

论文题目: PDX-1蛋白对细胞因子和棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 内分泌学

作者: 王守俊

导师: 王姮

关键词: 蛋白,蛋白的表达和纯化,基因克隆,凋亡,细胞因子,棕榈酸,大鼠胰岛

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由于胰岛素分泌不足和／或胰岛素抵抗引起的一组以血糖增高为主的疾病。无论是1型还是2型糖尿病，胰岛β细胞的凋亡都是重要的发病机制，在1型糖尿病中的免疫损害和2型糖尿病不能代偿胰岛素抵抗所致的葡萄糖毒性又加重了凋亡。目前糖尿病的治疗不能从根本上避免并发症的发生。胰腺十二指肠同原异形盒(Pancreatic Duodenum Homeobox-1，PDX-1)是胰岛素基因转录的主要调节因子，它对于胰腺的发育和维持胰岛β细胞特异基因的表达是必要的，可以促进胰岛β细胞分化，维持成熟β细胞的功能，但其对胰岛和β细胞的凋亡是否具有保护作用尚不清楚。比较肯定的是在发生凋亡时胞核中的PDX-1减少，而胞浆中的PDX-1增加。外源的PDX-1可以促进内源性pdx-1在胞核、胞浆间易位。PDX-1蛋白的结构中含有特殊的蛋白转导区(protein transduction domains，PTDs)，最新研究发现它可以使PDX-1蛋白不经过胞饮作用直接通过细胞膜进入细胞，因此本课题利用利用RT-PCR、Western blot等技术通过pdx-1基因克隆、pdx-1基因表达质粒的构建、PDX-1蛋白的表达和纯化来研究PDX-1蛋白对细胞因子(TNF-α and IL-1β)及棕榈酸(palmitic acid)所引起的原代新分离的大鼠胰岛细胞凋亡的保护作用，若其具有抗凋亡作用的话必将为PDX-1应用于糖尿病的防治提供广泛的理论基础。本研究主要包括以下三方面内容。一、pdx-1基因克隆及表达质粒的构建。雄性Wistar大鼠胰腺经胶原酶Ⅺ适度消化，将胰岛从胰腺上消化下来。不同浓度的Ficoll 400非连续性梯度离心，在解剖显微镜下挑拣梯度纯化后的胰岛。利用Trizol提取胰岛细胞总RNA，纯化和鉴定后经RT及巢式PCR先扩增出包含pdx-1基因的一段基因，而后以该段基因作为模板，设计适当的引物克隆出大鼠的pdx-1基因，经电泳及测序确定其准确性。将pdx-1基因和原核表达载体pET-21a(+)经Xho Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切，在连接系统作用下构建pET-21a(+)-pdx-1原核表达质粒，然后将构建的质粒经Xho Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切，经电泳及测序确定其准确性。二、PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定。将构建的表达质粒pET-21a(+)-pdx-1转化

论文目录:

中文摘要

英文摘要

缩略语表

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

综述

综述参考文献

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

[1].腺病毒介导的Akt1基因转染大鼠胰岛凋亡和功能影响的实验研究[D]. 张睿.中国医科大学2007
[2].体外高糖诱导SD大鼠胰岛细胞凋亡与厄贝沙坦的干预研究[D]. 梁杏欢.广西医科大学2008
[3].慢性应激与波动性高糖诱导的大鼠胰岛及INS-1细胞葡萄糖毒性[D]. 侯志强.山东大学2008
[4].大鼠胰岛β细胞P糖蛋白的表达及功能研究[D]. 汤云昭.天津医科大学2010
[5].内质网应激对高果糖喂养大鼠胰岛功能的影响及机制研究[D]. 赵永才.河北医科大学2015
[6].胰岛细胞激素敏感性脂肪酶在糖尿病发病中的变化及意义[D]. 王咏波.华中科技大学2007
[7].CSD基因在大鼠胰岛细胞中的表达及牛磺酸对大鼠糖尿病治疗作用研究[D]. 林树梅.沈阳农业大学2009
[8].阻断肾素血管紧张素系统对胰岛β细胞功能的效应及机制研究[D]. 李新.华中科技大学2009

PDX-1蛋白对细胞因子和棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

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