人端粒酶逆转录酶基因转染U2OS细胞对其基质金属蛋白酶-2活性的影响

论文摘要

目的:观察hTERT基因转染U2OS细胞对其基质金属蛋白酶2和9的影响,探讨hTERT基因和端粒酶的相关性。方法:RT-PCR和TRAP-ELISA法检测和明确对U2OS细胞hTERT基因的转染效果和转染阳性细胞克隆的筛选;明胶酶谱法和RT-PCR检测转染hTERT基因对细胞MMP-2,MMP-9表达和活性的影响。结果:hTERT基因转染U2OS细胞后,细胞成功的出现hTERT mRNA和明显的端粒酶活性（p<0.05）,使该细胞分泌酶原型MMP-（272KD）降低（p<0.05）,MMP-9完全消失。结论:hTERT稳定转染U2OS细胞克隆株,使细胞分泌酶原型MMP-9完全消失、酶原型MMP-2明显减少。但MMP-2在mRNA未见明显改变。

论文目录

• 内容提要
• 英汉缩略名词对照表
• 引言
• 材料和方法
• 一、材料
• 二 主要仪器
• 三、实验方法
• 1. 载体的鉴定和载体质粒 DNA 的扩增和抽提
• 2. 人骨肉瘤 U2OS 细胞培养、传代、冻存和复苏
• 3. 培养的 U2OS 细胞转染及阳性克隆的筛选
• 4. 阳性克隆转染效果的检测
• 5. U2OS 细胞转染hTERT 阳性克隆细胞的 MMP-2 观察
• 结果
• 1. 载体的鉴定和载体质粒 DNA 的扩增和抽提
• 2. pCI-neo-hTERT 转染 U2OS 细胞阳性克隆的筛选
• 3. 转染的 U2OS 细胞阳性克隆转染效果的检测
• 4. hTERT 转染U2OS 细胞的 MMP-2 观察
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢