黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖的实验研究

论文摘要

目的:研究黄芩苷体外对HepG-2细胞抑制增殖、诱导凋亡的作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用体外细胞培养方法,应用MTT法检测黄芩苷对HepG-2细胞的抗增殖作用及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜（scanning electronmicroscope,SEM）观察凋亡细胞的形态学及超微结构的改变;应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析细胞周期和凋亡率,观察黄芩苷对HepG-2细胞的诱导凋亡作用;通过免疫细胞化学（S-P法）检测凋亡相关基因bcl-2、bax、p53蛋白表达的改变;采用Western blot技术检测Caspase-3蛋白表达情况,初步探讨黄芩苷在体外对HepG-2细胞诱导凋亡作用的可能机制。结果:（1）MTT比色法结果表明,黄芩苷在体外对HepG-2细胞有明显的抑制作用,且这种抑制作用呈现浓度和时间依赖性。（2）形态学观察:倒置显微镜、扫描电镜及HE染色结果表明,黄芩苷作用于肿瘤细胞后,可诱导较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,如细胞胞体缩小,胞质浓缩,微绒毛结构减少甚至消失,胞核向外呈锐角突起,染色质高度浓缩,电子密度增高,边集于核膜下或呈新月形,有的出现核固缩,核碎裂以及凋亡小体形成等。（3）免疫细胞化学（S-P法）检测凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白表达明显减少、bax表达明显增加;Bcl-2/Bax比例明显降低。（4）流式细胞仪分析结果,50μg/ml黄芩苷作用于HepG-2细胞48h后,出现明显的细胞凋亡峰,其凋亡率为27.01%,与对照组细胞的凋亡率5.47%相比差异有显著性（P＜0.01）。且G2/M期细胞明显减少,而S期细胞比率显著上升,多数细胞阻滞在S期。（5）Western blot结果显示,随着药物浓度的增加Caspase-3酶原蛋白条带逐渐变细,并且可见到蛋白裂解产物（Caspase-3蛋白）逐渐增多。结论:黄芩苷对HepG-2细胞具有较强的抑制增殖和诱导凋亡的作用;黄芩苷诱导HepG-2细胞凋亡的机制可能与下调p53基因表达和降低Bcl-2/Bax比例,从而促进Caspase-3的活化有关。

论文目录

• 前言
• 摘要
• Abstract
• 第一章 材料
• 第二章 方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述