顺序注射固定化酶化学发光法测定葡萄糖的研究

论文摘要

本文对顺序注射固定化酶化学发光法测定葡萄糖进行了研究,制备了使用寿命长、性能稳定并且制作简单的固定化酶反应器,并与顺序注射化学发光分析法相结合,实现了分析操作的自动化,成功测定了血浆和尿液中的葡萄糖。论文第一章首先分别介绍了顺序注射和化学发光分析法的原理、特点及应用进展,然后介绍了固定化酶的固定化方法、常用的载体材料、固定化酶反应器的类型,以及顺序注射化学发光联用技术,最后提出本文工作的设计思想。论文第二章介绍了固定化酶反应器的制备方法,并应用于顺序注射化学发光分析法测定血浆和尿液中的葡萄糖。基于聚二甲基硅氧烷（PDMS）的自然粘接特性,制备了一种流阻低、比表面积大的双层固定化酶微粒的固定化酶反应器；设计了顺序注射固定化酶化学发光法联用流路,采用单因素法优化了进样顺序、试剂体积和浓度、进样体积、流速、停流时间等实验参数。方法的线性范围和检出限分别为2.5×10-5～7.0×10-4mol L-1、3.7×10-6mol L-1 （3σ）,对5.0×10-4mol L-1的葡萄糖溶液进行11次测定的相对标准偏差为1.2%,携出率小于5%,分析通量为63样／h。成功测定了血浆和尿液试样中的葡萄糖,回收率为96.7%-104.4%。第三章对制作的固定化酶反应器的特点以及建立的分析方法进行了总结和展望。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 顺序注射分析技术
• 1.2.1 顺序注射分析原理
• 1.2.2 顺序注射分析特点
• 1.2.3 顺序注射分析应用进展
• 1.3 化学发光分析法
• 1.3.1 化学发光分析法的原理
• 1.3.2 化学发光分析法的特点
• 1.3.3 常用化学发光体系
• 1.3.3.1 鲁米诺化学发光反应体系
• 1.3.3.2 光泽精化学发光反应体系
• 1.3.3.3 过氧化草酸酯化学发光反应体系
• 1.3.3.4 酸性高锰酸钾化学发光体系
• 1.3.3.5 钌（Ⅱ）—联吡啶配合物化学发光反应体系
• 1.3.3.6 吖啶酯类化学发光体系
• 1.3.3.7 其他化学发光体系
• 1.3.4 化学发光法的应用进展
• 1.4 固定化酶
• 1.4.1 固定化酶简介
• 1.4.2 常见固定化方法
• 1.4.2.1 吸附法
• 1.4.2.2 共价键合法
• 1.4.2.3 包埋法
• 1.4.2.4 交联法
• 1.4.3 固定化酶的载体材料
• 1.4.3.1 壳聚糖
• 1.4.3.2 溶胶—凝胶
• 1.4.3.3 无机材料
• 1.4.4 固定化酶反应器的类型
• 1.4.4.1 填充式反应器
• 1.4.4.2 开口管式反应器
• 1.4.4.3 单珠串反应器
• 1.5 顺序注射化学发光联用技术
• 1.6 本文设计思想
• 第二章 顺序注射固定化酶化学发光法测定葡萄糖
• 2.1 引言
• 2.2 试验部分
• 2.2.1 仪器和装置
• 2.2.2 试剂及配制
• 2.2.3 固定化酶反应器的制备
• 2.2.3.1 以CPG为载体的GOD的固定化
• 2.2.3.2 PDMS表面固定CPG微粒
• 2.2.3.3 固定化酶反应器的制作
• 2.2.4 实验原理
• 2.2.5 操作过程
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 固定化酶反应器的设计
• 2.3.2 进样顺序的影响
• 2.3.3 试剂体积的影响
• 2.3.4 试样体积的影响
• 2.3.5 鲁米诺浓度的影响
• 2.3.6 铁氰化钾浓度的影响
• 2.3.7 流速的影响
• 2.3.8 停流时间的影响
• 2.4 分析性能
• 2.4.1 共存物质的干扰
• 2.4.2 标准曲线及线性范围
• 2.4.3 检出限与精密度
• 2.4.4 连续换样与携出率
• 2.4.5 与其它方法的比较
• 2.5 样品的测定
• 第三章 结论
• 参考文献
• 致谢