T-2毒素的细胞毒性研究

论文摘要

T-2毒素是污染我国饲料的主要霉菌毒素，动物饲喂污染的饲料后会导致造血组织和免疫器官损伤、引起出血性综合症、出现白细胞减少、贫血、胃肠道功能紊乱等症状，因此，T-2毒素对畜禽健康和畜牧业生产的危害很大。为了探讨T-2毒素对家畜的毒性机理及诱导凋亡的分子机制，首先采用T-2毒素对猪的肝脏细胞进行暴露，暴露浓度为0、0.02、0.05、0.1mg/L，暴露时间为48小时，然后用基因芯片技术检测0.05mg/L处理组基因表达谱的变化。最后运用荧光定量PCR检测两个关于药物代谢的细胞色素P450家族的CYP2D25和CYP51的基因表达情况验证基因芯片的结果。结果表明，氧化应激和细胞凋亡相关基因发生上调，药物、脂质代谢和细胞生长的基因发生下调。0.05mg/LT-2毒素暴露48h的猪肝细胞与对照组的猪肝细胞相比，共有262个基因上调，231个基因下调。其中HSP90和HSP70类似蛋白的基因（应激相关基因）上调，caspase-1、caspase-15（凋亡相关基因）也上调；另一方面，3-β羟基类固醇脱氢酶（脂质代谢）和细胞色素P450家族的CYP2D25和CYP51（药物代谢）基因发生下调，cyclin D1、D2（细胞生长）相关基因表达也下调。为了进一步探讨T-2毒素对细胞毒性的影响，改用T-2毒素对SW1353细胞进行暴露，进行MTT检测细胞活性，荧光定量PCR检测P53、bcl-2、bax的基因差异情况，结果表明T-2毒素能够明显抑制SW1353细胞活性，上调P53、bax的基因表达，下调bcl-2的基因表达，从而诱导细胞凋亡。T-2毒素对猪的毒性机制可能是：通过丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径的激活，引起氧化应激，而氧化应激可以引起包括凋亡、生长受阻、转录因子激活等多种细胞损伤，并且能够导致脂质过氧化，最后导致细胞凋亡。在细胞凋亡的同时，药物代谢和脂质代谢受到抑制，表现为相关基因水平下调。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 细胞的分离和培养
• 2.2.2 细胞染毒
• 2.2.3 总 RNA 的提取
• 2.2.4 基因芯片的定制
• 2.2.5 CDNA 的合成
• 2.2.6 实时荧光定量 PCR 反应
• 2.2.7 MTT 实验
• 3 结果与分析
• 3.1 猪肝细胞的试验结果
• 3.1.1 猪肝细胞分离和培养结果
• 3.1.2 芯片结果
• 3.1.3 猪肝细胞荧光定量 PCR 的结果
• 3.2 SW1353 试验结果
• 3.2.1 SW1353 MTT 结果
• 3.2.2 SW1353 荧光定量 PCR 的结果
• 4.讨论
• 4.1 T-2 毒素对猪肝细胞相关基因的影响
• 4.2 T-2 毒素对猪肝细胞中细胞色素 P450 基因的影响
• 4.3 T-2 毒素对 SW1353 细胞活性的影响
• 4.4 T-2 毒素对 SW1353 细胞凋亡相关基因的影响
• 论文主要结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的学术论文