论文摘要
核酸疫苗(DNA疫苗)是指将含有编码抗原基因的真核表达载体直接接种体内,在体内表达相应抗原刺激机体产生针对该抗原的免疫应答,产生保护性免疫。核酸疫苗由于其独特的双免疫激活作用而受到越来越多的关注,有一些核酸疫苗已经进而Ⅱ期、Ⅲ期临床研究,然而,核酸疫苗的免疫效果却始终不甚理想,在动物实验中,对于猴子、猩猩等大动物,疫苗用量过大,为此,探索增强核酸疫苗免疫效果及降低疫苗用量的策略研究是十分必要的。 剂型改造是提高DNA疫苗免疫效果的方法之一。本课题中探讨了一种新型的DNA疫苗给药系统,用聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)包裹DNA疫苗形成微球疫苗后免疫小鼠,观察免疫后小鼠体液免疫、细胞免疫及粘膜免疫的效果。实验中,以乙肝治疗性DNA疫苗和多表位口蹄疫DNA疫苗为候选疫苗,应用PLGA包裹形成微球疫苗,首先在体外实验中验证了疫苗微球对抗原递呈细胞的靶向作用。小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞被用于体外吞噬实验,模拟抗原递呈细胞对疫苗抗原的摄取过程。通过姬姆萨染色,证实了微球疫苗的可吞噬性;荧光标记的疫苗微球的应用,可以更准确的动态观察微球的吞噬过程,在吞噬的2小时、4小时、8小时后分别收集细胞荧光显微镜观察,可以看到随着时间延长,细胞内点状荧光逐渐融合,荧光强度逐渐增加,进一步证实微球的可吞噬性。吞噬后的微球能否成功释放疫苗,疫苗抗原能否正确表达?后续实验中,在体内、体外两个层面上证实了抗原成份在抗原递呈细胞中的正确表达。当应用PLGA包裹的乙肝DNA疫苗口服免疫小鼠后,可全面的激发机体的细胞免疫和体液免疫,还可在局部引流淋巴结中观察到疫苗抗原的表达,观察到体现粘膜免疫效果的IgA的分泌,充分证实了口服乙肝DNA疫苗良好的免疫效果,获得了有应用前景的口服治疗性乙肝DNA疫苗。在多表位口蹄疫DNA疫苗的研究中发现,PLGA包裹可以降低疫苗的免疫剂量、减少疫苗的免疫次数,使新型口蹄疫DNA疫苗更廉价、使用更方便。 膜联蛋白B1基因是本课题组以免疫筛选法从猪囊尾蚴cDNA文库中得到的一个新基因,其基因产物是猪带绦虫囊虫病的诊断用抗原,也是很好的保护性抗原,以annexin B1为抗原基础构建的囊虫DNA疫苗,在猪的保护性实验中可保护仔猪免于虫卵冲击后的感染或提高减虫率。对于一个高免疫原性的疫苗抗原,其结构的解析、生物学活性的认识是安全、有效的利用疫苗抗原的基础,为了找到能
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