论文摘要
目的：探讨选择性COX-2抑制剂塞来昔布通过PI3K/Akt通路调控人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的分子机制。方法：不同浓度、不同时间塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901后,采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,吖啶橙荧光染色观察细胞形态学改变,DNA原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞超微结构的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8 （caspase-8）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9 （caspase-9）、蛋白激酶B（Akt）的表达。结果：塞来昔布对人胃癌细胞株SGC-7901有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性。125μmol/L塞来昔布处理SGC-7901细胞72h时,药物对细胞生长的抑制率最高达85.6%。吖啶橙荧光染色观察到凋亡小体,TUNEL法检测到凋亡细胞。透射电镜下观察到典型的凋亡改变：细胞核膜皱缩、染色质高度凝聚并边缘化产生凋亡小体。值得注意的是,我们还在胞浆的多个位置观察到自噬空泡和自噬体,自噬体内的细胞器清晰可见；流式细胞术检测到细胞凋亡率从2.24%上调到35.67%；塞来昔布干预后,实验组Akt mRNA表达水平的改变无统计学意义,P-Akt蛋白的表达下调并呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）；实验组凋亡起始蛋白caspase-8 mRNA水平上调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）；实验组凋亡起始蛋白caspase-9 mRNA表达水平较对照组均上调,但125μmol/L塞来昔布作用24h组（?）mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,48h和72h组与对照相比差异有统计学意义（P<0.05）。塞来昔布作用72h后,75μmol/L组caspase-9 mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,100μmol/L和125μmol/L组与对照相比差异有统计学意义（P<0.05）;实验组procaspase-8和procaspase-9蛋白被活化,表达量下调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1.塞来昔布可能通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡和细胞自噬两种程序性死亡方式导致细胞死亡。2.塞来昔布对人胃癌细胞株SGC-7901有显著增殖抑制作用。3.塞来昔布诱导胃癌细胞凋亡的分子机制为线粒体途径和死亡受体途径。