维甲酸和叶酸通过Notch信号通路影响神经干细胞的分化研究

论文摘要

目的研究维甲酸和叶酸对神经干细胞增殖、凋亡的影响,研究维甲酸和叶酸通过影响Notch信号通路对神经干细胞分化的影响,为研究中枢神经系统发育、神经元轴突重塑、神经再生及神经系统疾病的治疗打下基础。方法用不同浓度维甲酸刺激神经干细胞,在干预过程中加入叶酸,运用细胞免疫荧光和增殖实验来观察维甲酸和叶酸对神经干细胞增殖的影响;运用DNA ladder、流式细胞术和TUNEL实验技术来观察维甲酸和叶酸对神经干细胞凋亡的影响;运用细胞免疫荧光、激光共聚焦、RT-PCR、实时荧光定量PCR技术来研究维甲酸和叶酸对神经干细胞Notch信号通路的影响,并通过这条通路诱导神经干细胞畸形分化。结果1、适量维甲酸对神经干细胞的增殖没有明显作用,和叶酸共用能够促进NSC增殖,且比单纯使用叶酸增殖效果明显。2、过量全反式维甲酸能够引起NSC凋亡,但是较高浓度叶酸能够拮抗维甲酸的这种作用,使凋亡率下降。3、1μM维甲酸能够抑制Notch信号通路相关分子表达,引起NSC定向分化为神经元和星型胶质细胞,但是不能分化为少突胶质细胞4、维甲酸通过Notch通路引发的促分化作用可以被叶酸抑制或者减轻。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略语
• 前言
• 一、神经干细胞的体外培养鉴定及维甲酸和叶酸对其增殖情况的研究
• 1. 主要材料
• 2. 实验方法
• 2.1 神经干细胞培养
• 2.2 神经干细胞的Nestin和Brdu双染鉴定
• 2.3 神经干细胞的多向分化鉴定
• 2.4 CCK-8 鉴定维甲酸和叶酸对神经干细胞的增殖
• 3. 结果
• 3.1 神经干细胞培养结果
• 3.2 神经干细胞具备自我更新能力
• 3.3 神经干细胞具备多向分化潜能
• 3.4 维甲酸和叶酸联合使用可以促进神经干细胞的增殖
• 4. 讨论
• 二、维甲酸和叶酸对神经干细胞凋亡的影响
• 1 主要材料
• 2 实验方法
• 2.1 DNA ladder凝胶电泳检测
• 2.2 AnnexinV /PI双染法凋亡检测
• 2.3 TUNEL法检测细胞凋亡
• 3. 结果
• 3.1 DNA ladder结果
• 3.2 维甲酸和叶酸对神经干细胞凋亡的AnnexinV / PI双染法分析
• 3.3 维甲酸和叶酸对神经干细胞凋亡影响的TUNEL结果
• 4. 讨论
• 三、维甲酸和叶酸通过Notch信号通路影响神经干细胞的分化
• 1. 主要材料
• 2. 实验方法
• 2.1 维甲酸诱导神经干细胞分化
• 2.2 神经干细胞总RNA的提取
• 2.3 反转录成cDNA
• 2.4 荧光定量PCR检测
• 3 结果
• 3.1 维甲酸可以诱导神经干细胞分化为神经元和胶质细胞
• 3.2 RNA完整性检测结果
• 3.3 维甲酸可以有效降低Notch-1 的表达，叶酸可以减缓这种趋势
• 3.4 维甲酸对Notch信号通路其他分子相对表达量的影响
• 4. 讨论
• 参考文献
• 综述：Notch：神经分化与再生的关键基因
• 1.Notch通路简介
• 2.Notch与NSC分化
• 3.Notch对NSC的其他影响
• 4.Notch与神经再生
• 5、展望
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢