5种中药体外抗鼻咽癌作用筛选及石上柏提取物诱导鼻咽癌细胞凋亡机制的研究

论文摘要

背景和目的鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤之一,目前以放、化疗治疗鼻咽癌,只能使5年生存率达到50%～70%,鼻咽癌放化疗耐受和治疗并发症严重影响治疗效果。寻找对鼻咽癌治疗更有效、毒副反应更小的药物,提高疗效是临床治疗迫切需要解决的问题。传统中医药是人们在生活、疾病中不断总结、筛选而得,经过临床实践和基础研究发现多种中草药有抗肿瘤作用,但是否有抗鼻咽癌作用仍有待研究。本课题采用体外抗鼻咽癌中药筛选模型,比较5种广西常见中药的抗鼻咽癌效果,筛选出一种较佳的抗鼻咽癌药物,并对其抗鼻咽癌作用机制进行研究。方法通过提取中药、血清药理学、体外MTT实验方法,比较白花蛇舌草、半枝莲、仙鹤草、石上柏、两面针,5种中药提取物和含药血清对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞生长的抑制率。用体外抗鼻咽癌作用较强的石上柏提取物,观察对小鼠的急性毒性,处理鼻咽癌细胞和正常人胚肺成纤维细胞株HFL-I后,MTT法检测抑制率,倒置相差显微镜观察细胞的形态学改变,碘化丙啶（PI）标记流式细胞术检测鼻咽癌细胞周期分布,Annexin V-FITC和PI标记流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达变化。结果石上柏的提取物和含药血清对CNE1、CNE2细胞生长均有明显抑制作用,有剂量-效应和时间-效应关系;高浓度的两面针提取物和其低浓度含药血清对CNE1、CNE2细胞生长有一定抑制作用;较高浓度的白花蛇舌草提取物、半枝莲提取物和仙鹤草提取物对CNE1、CNE2生长有一定的抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系,但其含药血清对CNE1、CNE2生长未见抑制作用。2.5mg/mL石上柏提取物可显著抑制鼻咽癌细胞的生长,而对正常人胚肺成纤维细胞株HFL-I细胞生长影响较小;小鼠经720g/kg石上柏提取物灌胃,7天内无死亡,肝肾功能和病理切片未见明显异常;石上柏提取物作用于鼻咽癌细胞后,细胞生长受抑,形态改变;流式细胞术检测细胞周期分布显示,石上柏提取物诱导鼻咽癌细胞S期阻滞;流式细胞术检测细胞凋亡显示,鼻咽癌细胞凋亡率随着石上柏提取物浓度的升高而逐渐升高;免疫细胞化学实验显示,石上柏提取物处理后的细胞与对照组细胞相比:Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减少。结论石上柏提取物和含药血清在体外能显著抑制人鼻咽癌细胞生长,体内和体外急性毒性较小;诱导鼻咽癌细胞S期阻滞,可能为细胞周期特异性药物,诱导鼻咽癌细胞凋亡,其作用机制与Bax、Bcl-2蛋白表达改变有关。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 中药抗鼻咽癌作用的筛选
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二部分 石上柏抗鼻咽癌作用机制的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 全文总结
• 参考文献
• 综述
• 硕士期间发表论文
• 致谢