论文摘要
目的:(1)观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对结肠癌细胞株SW480,HT29,HCT116的不同敏感性及三株结肠癌细胞c-Flip蛋白的基础表达水平。(2)探讨PI3K/Akt信号通路在TRAIL诱导结肠癌细胞c-Flip表达过程中的作用,揭示结肠癌细胞对TRAIL敏感性发生改变的部分机制。方法:以结肠癌细胞株SW480,HT29,HCT116为研究对象。(1)用MTT法和流式细胞术检测不同时间(0,6,12,24,48h)和不同浓度(0,25,50,100ng/ml)的TRAIL对这3株细胞的凋亡率的影响(其中流式细胞术检测100ng/ml TRAIL作用48小时的细胞凋亡率)。(2)Western blot检测三株细胞中c-Flip蛋白的表达水平。(3)根据细胞株对TRAIL的不同敏感性以及c-Flip蛋白的表达水平,选取相对不敏感细胞株HT29进行下一步实验,将其分为空白组;加入TRAIL(100ng/ml)组;以及用特异性抑制剂ly294002预处理后加入TRAIL(100ng/ml)组。用流式细胞术分别检测3组细胞凋亡率的变化,并用Western blot检测c-Flip蛋白表达的变化情况。(4)用100ng/ml TRAIL分别刺激HT29细胞不同时间(0,15,30,60,120min)后,Western blot检测磷酸化Akt表达水平的变化。结果:(1)SW480和HCT116对TRAIL相对敏感,且呈时间剂量依赖性,而HT29相对不敏感。(2)C-Flip蛋白在三株细胞中的表达水平不同,且可能与它们对TRAIL的不同敏感性有关。(3)将HT29细胞分为3组(分别为空白组,100ng/ml TRAIL组,ly294002+100ng/mlTRAIL组)进行处理,结果显示ly294002预处理组的c-Flip蛋白表达水平明显降低,流式细胞术检测发现ly294002预处理组的凋亡率明显增加。(4)HT29细胞的p-Akt的基础表达水平较高,100ng/ml TRAIL作用HT29细胞15,30,60,120min后,p-Akt蛋白的表达明显降低,但各组间的p-Akt表达无明显差异。结论:(1)不同结肠癌细胞株对TRAIL有不同的敏感性:SW480和HCT116对TRAIL相对敏感,而HT29相对不敏感。(2)通过PI3K/Akt通路可下调c-Flip的表达,并使结肠癌细胞HT29对TRAIL的敏感性发生逆转。
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