论文摘要
第一部分大鼠部分肝切除自体肝移植模型的建立目的:探讨大鼠部分肝切除自体余肝移植模型的建立方法,为自体肝脏移植临床及基础研究提供理想的动物模型。方法:采用SD大鼠,在现有自体肝移植模型基础上进行简化和改进,摈弃传统的门、腔及颈内静脉置管转流方法,改进冷灌注方法,建立了研究大鼠部分肝切除自体余肝移植模型。共实施大鼠肝移植150例,其中定型手术120例。结果:120例定型手术中,门静脉、下腔静脉置管时间1～2 min,无肝期为16～20（中位时间18.15±2.15）min,切除大鼠约2/3的肝脏,手术成功率为96.7%（116/120）。结论:本模型简单易行,手术时间短,重复性好,特别适用于研究各种外加因素对自体肝移植残余肝脏的影响,为部分肝切除自体肝移植的基础理论研究提供了较为理想的研究手段。第二部分姜黄素预处理对自体肝移植大鼠肝缺血/再灌注损伤保护作用的研究目的:探讨姜黄素预处理对部分肝切除自体余肝移植后大鼠肝缺血/再灌注损伤的保护作用及其对中性粒细胞浸润、TNF-α和ICAM-1表达的影响。方法:采用SD大鼠,在现有自体肝移植模型基础上进行简化和改进,建立了研究大鼠冷灌注过程中部分肝切除自体肝移植模型。依据预处理药物的不同,将大鼠随机分为姜黄素预处理（CU）组（50mg/kg）和0.5%羧甲基纤维素钠（溶剂）预处理对照（CM）组;另设假手术（SO）组作对照。各组分别于再灌注后2h、6h、24h各处死6只动物。检测各时点大鼠血清丙氨酸转氨酶（alanine transaminase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase,AST）;HE染色切片行组织病理学检查;比色法测定髓过氧化物酶（MPO）含量;Real-TimePCR检测TNF-α和ICAM-1mRNA的表达;免疫组织化学染色检测TNF-α和ICAM-1蛋白的表达。结果:再灌注后2h、6h及24h各时间点,CU组血清ALT及AST水平均明显低于CM组（P<0.05）;再灌注后6h,CM组大鼠肝组织中MPO含量高于CU组（P<0.05）;再灌注2h后,CU组的TNF-α和ICAM-1mRNA的表达明显低于CM组,而再灌注6h后,CU组大鼠肝组织中TNF-α和ICAM-1蛋白的表达水平明显低于CM组（P<0.01,P<0.05）。结论:TNF-α和ICAM-1的表达增强、中性粒细胞浸润在自体肝移植IRI过程占有重要地位;姜黄素预处理自体肝移植肝脏有显著的肝脏保护作用;降低TNF-α和ICAM-1mRNA和蛋白的表达、抑制中性粒细胞浸润与姜黄素对自体肝移植肝脏的保护作用有关。第三部分姜黄素预处理对自体肝移植大鼠肝再生影响的研究目的:探讨姜黄素预处理对大鼠部分肝切除自体余肝移植后大鼠肝再生的保护作用及其对肝细胞凋亡、Bcl-2、TNF-α和NF-KB表达的影响。方法:采用SD大鼠,在现有自体肝移植模型基础上进行简化和改进,建立了研究大鼠冷灌注过程中部分肝切除自体肝移植模型。依据预处理药物的不同将大鼠随机分为姜黄素预处理（CU）组（50mg/kg）和0.5%羧甲基纤维素钠预处理对照（CM）组;另设肝切除+冷灌注（HE）组作对照。各组分别于再灌注后2h、24h、48h、72h、168h各时间点处死4只动物。天平称重各时点肝脏质量,计量肝再生率;HE染色切片行组织病理学检查;TUNEL法检测肝细胞的凋亡;全自动智能有丝分裂指数系统测定有丝分裂指数（MI）;Real-TimePCR检测Bcl-2、TNF-α和NF-KB mRNA的表达;免疫组化染色检测Bcl-2、TNF-α和NF-KB蛋白的表达。结果:再灌注24h后,CU组肝脏再生率显著高于CM组（P<0.01）,可观察到大量的细胞核有丝分裂增殖像;再灌注24h-72h,CU组MI显著高于CM组（P<0.01）;再灌注后各时点CU组凋亡指数（AI）显著低于CM组（P<0.01,P<0.05）;再灌注后各时点CU组Bcl-2和NF-KB mRNA均高于CM组,再灌注24h后,CU组Bcl-2和NF-KB蛋白高于CM组（P<0.01,P<0.05）;复灌后48h内,CM组TNF-αmRNA及蛋白均持续高水平表达且明显高于CU组（P<0.01,P<0.05）。结论:IRI过程延缓并损伤了肝细胞的再生并诱发细胞凋亡;IRI诱发细胞凋亡机制可能与诱导TNF-α的持续过量表达有关;上调Bcl-2的表达、抑制TNF-α的持续过量表达是姜黄素减轻肝细胞细胞凋亡的关键;姜黄素有显著的肝再生功能保护作用;抑制TNF-α的持续过量表达、上调NF-KB的表达、抑制细胞凋亡与姜黄素保护肝脏再生功能有关。
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