姜黄素衍生物FM04抗肿瘤作用及其机制

论文摘要

研究背景和目的:姜黄素（Curcumin ,Cur）系从姜科植物姜黄中提取的酚性有效单体化合物,具有抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗炎、抗血小板聚集等广泛的药理作用[1]。近年来,有关姜黄素的药理学研究尤其在抑制细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等方面的作用日益受到重视。但是姜黄素水溶性差,水溶液易水解,首过消除现象明显,生物利用度低,成为限制其临床应用的主要因素和产业化的瓶颈[2]。本实验保留分子中共扼β-二酮链等活性必需基团,设计合成新的姜黄素衍生物FM04。本文降进一步研究FM04对体外培养的肿瘤细胞和动物移植性肿瘤的抑制作用及特点,并初步探讨它的作用机制。研究方法:应用MTT法检测姜黄素衍生物FM04对细胞增殖的影响;应用集落形成法观察FM04对细胞增殖的影响;应用光学显微镜观察细胞形态变化,应用AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡;采用Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率。FM04（50mg/kg/d）连续腹腔注射10天,观察FM04对小鼠黑色素瘤B16的生长抑制率。应用Western blot法检测P210bcr/abl及其下游通路蛋白表达的变化和线粒体细胞色素C的变化;比色法测定Caspase-3、Caspase-9活化程度。研究结果: FM04能显著抑制多种肿瘤细胞增殖,呈时间和剂量依赖关系;能影响K562细胞的集落形成,呈量效关系;连续腹腔注射FM04（50mg/kg/d）10天,对小鼠黑色素瘤B16的生长抑制率54.1%,与对照组相比具有显著性差异（P<0.05）,说明FM04在体内、体外试验均表现出良好的肿瘤抑制作用。FM04可显著下调P210bcr/abl及其下游信号通路蛋白;可促进细胞色素C释放入胞浆,激活caspase-3/9的活性,触发K562细胞凋亡。结论:FM04具有显著的体内、外抗肿瘤作用,对于K562细胞,能通过减少P210的蛋白含量从而下调p210Bcr-Abl下游多种信号分子表达,通过激活caspase的活化和线粒体内细胞色素C的释放,最终诱导K562细胞的凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一部分 姜黄素衍生物FM04 体内外抗肿瘤作用
• 1 实验材料与仪器
• 1.1 细胞系
• 1.2 实验动物及动物瘤株
• 1.3 主要药物和试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 主要溶液配制
• 2 实验方法
• 2.1 FM04 体外抗肿瘤作用的研究
• 2.1.1 细胞培养
• 2.1.2 MTT 法观察FM04 对细胞增殖的抑制作用
• 2.1.3 FM04 对K562 细胞克隆形成的影响
• 2.1.4 FM04 对 K562 细胞凋亡的观察
• 2.2 体内抗肿瘤作用的研究（对小鼠实体瘤的抑制作用）
• 2.3 统计学方法
• 3 结果
• 3.1 FM04 体外抗肿瘤作用的研究
• 3.1.1 FM04 对肿瘤细胞增殖的抑制作用
• 3.1.2 FM04 对K562 细胞克隆形成的影响
• 3.1.3 FM04 对K562 细胞形态的影响
• 3.1.4 FM04 诱导细胞凋亡的作用
• 3.2 FM04 的体内抗肿瘤作用
• 4 讨论
• 5 结论
• 第二部分 姜黄素衍生物FM04 抗慢性粒细胞白血病机制的初步探讨
• 1 实验材料与仪器
• 1.1 细胞系
• 1.2 主要药物和试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要溶液配制
• 2 实验方法
• 2.1 胞浆部分（S-100）和线粒体部分裂解液提取
• 2.2 分光光度法检测 Caspase-9 和 Caspase-3 的活性
• bcr/abl 等信号蛋白表达'>2.3 蛋白免疫印迹（Western Blot）观察P210^bcr/abl等信号蛋白表达
• 2.4 统计学方法
• 3 结果
• 3.1 FM04 对线粒体凋亡途径的影响
• 3.1.1 FM04 触发 K562 细胞线粒体细胞色素 C 释放
• 3.1.2 FM04 活化 Caspase-3 和 Caspase-9
• bcr/abl 及其下游信号通路蛋白的影响'>3.2 FM04 对K562 细胞中p210^bcr/abl及其下游信号通路蛋白的影响
• bcr/abl 蛋白含量'>3.2.1 FM04 下调K562 细胞p210^bcr/abl蛋白含量
• bcr/abl下游相关信号通路蛋白含量的影响'>3.2.2 FM04 对K562 细胞p210^bcr/abl下游相关信号通路蛋白含量的影响
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢