论文摘要
目的:近年,大量证据表明非甾体抗炎药（NSAIDs）与癌症低发生率之间存在联系,流行病学研究显示使用非甾体抗炎药使人类结直肠癌死亡率较非使用者下降40-50%,非甾体抗炎药可抑制环氧化酶-1和环氧化酶-2的活性,限制花生四烯酸催化合成各种前列腺素和血栓素产物。COX-1表达于血小板和胃粘膜, COX-2被诱导表达于炎症部位和肿瘤。在各种肿瘤细胞均可见COX-2过表达。因此,受非甾体抗炎药抑制的内源性前列腺素合成可能部分控制了细胞增殖过程。然而,目前非甾体抗炎药抑制肿瘤并诱导肿瘤细胞凋亡的机制仍然不清楚。凋亡是一个随多种基因的活动和表达改变而受到调控的过程。数十种诱导和抑制细胞凋亡过程的基因已被克隆和分析。生存素（survivin）是Wnt信号传导通路中阻碍细胞死亡和控制有丝分裂的基因。在正常成人不能检测到,在几乎所有的人类肿瘤中显著表达。非甾体抗炎药在体外可通过抑制Wnt信号通路降低survivin的表达,但体内研究未见报道。COX-2是一种可用现有药物抑制的酶,对肿瘤的生物学行为有显著的影响,可作用于多种肿瘤类型。其参与了肿瘤生成的多个环节,一个可能的抗肿瘤机制是其抑制了新生血管的生成,另外还可能调控细胞因子合成,影响细胞增殖和凋亡,调控核转录和肿瘤抑制基因产物的功能。但是,肿瘤生成和发展是一个复杂的过程,只靠COX-2抑制剂不可能对肿瘤产生致死性的影响,因此,联合应用COX-2抑制剂和化疗药物可能同时产生细胞毒作用和抗血管生成效应,或者克服多药耐药性而促进抗肿瘤效果。假定环氧化酶-2抑制剂塞来昔布和化疗药物奥沙利铂的抗肿瘤作用机制不同,两药联合应用可能增加抗肿瘤疗效。本研究在裸鼠皮下建立肺癌移植瘤模型,评估不同剂量的塞来昔布或联合奥沙利铂对肺癌肿瘤生长,survivin表达和血管生成的影响。同时探讨抑癌基因FEZ1与抗凋亡因子Survivin在肺小细胞癌和低分化鳞状细胞癌中的表达及其作用,方法:1.应用免疫组化及流式细胞定量分析技术检测肺小细胞癌和低分化鳞状细胞癌中FEZ1、Survivin蛋白的表达;并比较分析正常肺组织、小细胞癌和低分化鳞状细胞癌的凋亡率与增殖指数。2.将人肺癌A549细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,然后随机分为四组:对照组,塞来昔布一组（25 mg.kg-1.d-1）,塞来昔布二组（50 mg.kg-1.d-1）,塞来昔布三组（100 mg.kg-1.d-1）,并给予相应剂量的塞来昔布。每周测量肿瘤体积,给药42天后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2, VEGF, Survivin表达和微血管密度（MVD）。3.将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,然后随机分为四组（对照组;塞来昔布组;奥沙利铂组;奥沙利铂和塞来昔布组）并给予相应的药物。每周测量肿瘤体积,给药42天后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2, VEGF, Survivin表达和微血管密度（MVD）。结果:1. FEZ1、Survivin在肺小细胞癌及低分化鳞状细胞癌蛋白表达及其在凋亡中的作用免疫组化结果显示,在小细胞癌和低分化鳞癌,FEZ1蛋白阳性表达率分别为72.22% （26/36）,39.19%（29/74）,Survivin蛋白阳性表达率分别为75. 00%（27/36）、52.70%（39/74）,其差异均有统计学意义。表明FEZ1蛋白和Survivin蛋白在小细胞癌中表达均强于低分化鳞状细胞癌。流式细胞术检测结果显示,在小细胞癌与低分化鳞状细胞癌中FEZ1蛋白含量分别为（656.06±81.23）、（597.24±39.84）,Survivin蛋白含量分别为（606.10±51.28）、（577.77±52.99）,之间差异均有显著统计学意义（P<0.05）。这与免疫组化的结果相一致。我们进一步比较了不同恶性度肺癌的凋亡及增殖情况,正常肺组织、低分化鳞状细胞癌、小细胞癌的凋亡率分别为:4.61±2.16、10.03±3.37及11.47±4.30;增殖指数分别为40.09±9.68、48.23±10.33、52.08±8.60,结果表明,与正常组织相比,癌组织的凋亡率及增殖活性明显升高,随着肿瘤恶性度的升高,其凋亡率及增殖活性也越高（p < 0.05）,肿瘤生长速度也越快。2.不同剂量塞来昔布对人肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用及机制研究34只裸鼠成瘤,成瘤率100%,肿瘤细胞种植后第17天,肿瘤直径平均达4mm。在实验期内,塞来昔布三组裸鼠死亡2只。治疗结束后,各组移植瘤体积分别为:对照组3124±657mm3;塞来昔布一组2093±609 mm3;塞来昔布二组1652±463 mm3;塞来昔布三组1341±282 mm3。塞来昔布能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长。塞来昔布一组,二组,三组的抑瘤率分别为34.60%,49.40%和59.71%。与对照组比较,塞来昔布各用药组肿瘤生长缓慢,有统计意义（分别P < 0.05）。塞来昔布三组抑瘤率较塞来昔布一组抑瘤率明显提高（P < 0.05）。塞来昔布二组抑瘤率高于一组,低于三组,但差别无统计学意义（分别P > 0.05）。以图像分析系统对COX-2免疫组织化学染色切片进行积分光密度测定,统计学方差分析结果显示,与对照组比较,塞来昔布各组COX-2表达水平均明显降低,（分别P < 0.05）;与塞来昔布一组比较,塞来昔布三组COX-2表达水平明显降低（P < 0.05）,塞来昔布二组与一、三组之间比较,COX-2表达水平无差别。对survivin的免疫组织化学染色切片进行统计学分析,与对照组比较,塞来昔布各用药组survivin表达均下降,差别有统计学意义（分别P < 0.05）。与塞来昔布一组比较,塞来昔布二组和三组Survivin表达水平明显降低,差别有统计学意义（分别P<0.05）。塞来昔布二、三组之间差异无统计学意义（P > 0.05）)。将RT-PCR产物经电泳分析,对各条带进行灰度测定,比较显示,塞来昔布各组VEGF-mRNA表达低于对照组,差别有统计学意义（分别P < 0.05）,塞来昔布各用药组之间VEGF-mRNA表达差别无统计学意义（P > 0.05）。免疫组织化学染色后对微血管热区进行计数,方差分析两两比较结果显示,塞来昔布用药各组MVD值均较对照组降低,差别有统计学意义（分别P < 0.05）。塞来昔布一、二、三组之间比较,MVD无显著性差别（P > 0.05）。3.塞来昔布联合奥沙利铂对人肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用及其作用机制治疗结束后,各组移植瘤体积分别为:对照组3124±657.41mm3;塞来昔布组2093.12±608.93 mm3;奥沙利铂组1736±336.46 mm3;联合用药组1152±247.89 mm3。塞来昔布和化疗药物奥沙利铂均能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长。塞来昔布和化疗药物奥沙利铂抑瘤率分别为34.60%和46.70%,两者联用抑瘤率明显增加,达66.09%。与对照组比较,塞来昔布组、奥沙利铂组和联合用药组肿瘤生长明显缓慢（P < 0.05）。联合用药组抑瘤率较塞来昔布和奥沙利铂单用抑瘤率明显提高（P < 0.05）。塞来昔布和奥沙利铂对移植瘤生长抑制作用无明显差异（P > 0.05）。从生长曲线观察,在肿瘤生长早期,塞来昔布较奥沙利铂有更明显的抑瘤作用。而随肿瘤的生长,奥沙利铂显示出更明显的抑瘤效果。以图像分析系统对COX-2免疫组织化学染色切片进行积分光密度测定,方差分析结果显示,奥沙利铂组COX-2表达高于对照组,差别有统计学意义（P < 0.05）。塞来昔布组COX-2表达水平低于对照组,差别有统计学意义（P < 0.05）,联合用药组与对照组比较COX-2表达水平无差别（P > 0.05）。对survivin的免疫组织化学染色切片进行统计学分析,与对照组比较,奥沙利铂组、塞来昔布组和联合用药组survivin表达均下降,差别有统计学意义（P < 0.05）。联合用药组Survivin表达水平与奥沙利铂组和塞来昔布组比较明显降低,差别有统计学意义（P < 0.05）。Western blot方法对survivin蛋白的测定结果与免疫组织化学染色方法测定结果相一致。将RT-PCR产物经电泳分析,奥沙利铂组VEGF表达高于对照组,差别有统计学意义（P < 0.05）,塞来昔布组和联合用药组VEGF表达低于对照组,差别有统计学意义（P < 0.05）。塞来昔布组和联合用药组比较VEGF表达无差别（P > 0.05）。免疫组织化学染色后对微血管热区进行计数,奥沙利铂组与对照组比较,MVD值无显著性差别（P > 0.05）,塞来昔布组和联合用药组MVD值均较对照组降低,差别有统计学意义。结论:1. FEZ1、Survivin基因的蛋白表达水平在小细胞肺癌、低分化鳞状细胞癌间存在明显差异。低分化鳞状细胞癌及小细胞癌的凋亡率及增殖指数高于正常肺组织,在肺癌的诊断、治疗方面为临床提供了可靠的依据。2.不同剂量的塞来昔布均能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长和survivin的表达,其抑制作用呈明显的用药剂量依赖性,Survivin参与了塞来昔布抑肺癌生成的过程。低剂量塞来昔布可抑制人肺癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用。3.塞来昔布可抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,COX-2、Survivin表达和血管生成。塞来昔布与奥沙利铂联合应用提高了奥沙利铂的抗肿瘤效果。塞来昔布和奥沙利铂联合应用可能通过抑制微血管生成而抑制肺癌的生长和转移。
论文目录
相关论文文献
标签：肺癌论文; 血管生成论文; 生存素论文; 环氧化酶抑制剂论文; 化疗论文; 凋亡论文; 血管内皮细胞生长因子论文;