维拉帕米作用于S6跨膜结构域的Y652和F656氨基酸残基阻断HERG离子通道

论文摘要

维拉帕米作用于S6跨膜结构域的Y652和F656氨基酸残基阻断HERG离子通道目的：研究维拉帕米对野生型及突变型HERG离子通道的阻断作用，并试图探寻发生在S6结构域的突变位点是否是维拉帕米与HERG结合的重要作用位点。方法：采用双微电极电压钳记录表达在非洲爪蟾卵母细胞上的HERG离子通道电流（野生型，Y652A型，F656A型）。结果：维拉帕米对野生型HERG离子通道的阻断作用呈浓度依赖性(半最大效应浓度，[IC50]=5.1μmol／L)，且稳态激活和失活参数都向负值增大的方向移动。然而，当位于S6结构域的氨基酸残基Y652和F656突变为丙氨酸后，通道的半最大效应浓度分别增大16倍和20倍。同时我们还发现，使用维拉帕米后，Y652A型通道的稳态激活和失活参数也都向负值增大的方向移动，而且维拉帕米阻断Y652A型通道的电压依赖性并未因此位点的突变而改变。结论：维拉帕米主要结合并阻滞开放状态下的HERG通道，位于S6结构域的两个芳香族氨基酸Y652和F656是通道与维拉帕米结合的重要位点。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分
• 前言
• 材料和方法
• 一、材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 1.3 溶液配制
• 1.4 实验仪器
• 二、方法
• 2.1 卵母细胞的制备
• 2.2 HERG通道基因的体外转录与表达
• 2.3 电压钳记录
• 2.4 药物
• 2.5 数据分析
• 结果
• 1.维拉帕米阻滞野生型和Y652A型HERG通道钾电流的电压依赖性
• 2.维拉帕米对野生型和Y652A型HERG钾通道失活的影响
• 3.维拉帕米阻滞野生型和突变型HERG通道钾电流的浓度依赖性
• 讨论
• 1.维拉帕米对HERG通道的阻断作用
• 2.临床意义
• 结论
• 第二部分 英文论文
• Abstract
• Introduction
• Materials and methods
• Results
• Discussion
• Acknowledgements
• References
• 第三部分 综述
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1.HERG离子通道的结构与功能
• 2.长QT综合征
• 2.1 LQTS的离子与分子机制
• 2.2 先天性长QT综合征
• 2.3 获得性QT延长综合症
• 2.3.1 药物引发LQTS的分子机制
• 2.3.2 药物引发LQTS诱发TDP的危险因素及预防
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 附录