植物美白提取物的筛选及作用机理探索

论文摘要

皮肤色素沉着是由各种内、外因素引起的以面部色素形成过多为表现的病理性变化,临床上常见于黄褐斑、雀斑和黑斑病等多种疾病。由于多方面因素的限制,目前尚缺乏完全有效的美白剂治疗,但经国内外众多学者的研究,结果表明植物提取物对于色素沉着性疾病具有一定的疗效。我们基于这个事实,从细胞分子生物学角度,研究不同种植物提取物在皮肤美白功能方面的作用机理。首先,以20种常见的植物提取物为对象,研究其酪氨酸酶抑制作用和抗氧化作用,筛选不仅具有强酪氨酸酶抑制活性,而且具有抗氧化性的植物提取物。结果表明,20种样品均表现出不同程度的酪氨酸酶抑制作用和抗氧化能力。其中,绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃具有显著的酪氨酸酶抑制活性和强抗氧化能力。其次,以B16小鼠黑素瘤细胞为受试细胞,探讨葡萄籽、绿茶、巴西大樱桃3种样品对细胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑色素合成的抑制作用。结果表明,葡萄籽、绿茶、巴西大樱桃3种样品对细胞内酪氨酸酶活性和黑色素的合成具有显著的抑制作用,而且无毒副作用。我们还证明了葡萄籽提取物对黑素瘤细胞内酪氨酸酶的蛋白表达有下调作用。在上述研究的基础上,以MRC-5人胚肺成纤维细胞为受试细胞,考察绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃3种样品对H2O2氧化损伤细胞模型的抗氧化保护作用。结果表明,上述3种植物提取物能有效地减轻H2O2对MRC-5细胞的损伤,并对细胞内的ROS活性氧具有一定的清除作用。最后,对绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃3种植物提取物进行了HPLC纯化及LC-MS的成分分析,发现三种植物提取物中可能的有效成分是维生素C或原花青素类物质。此外,将植物提取物制成美白化妆品成品,并对美白功效进行了验证试验,为化妆品美白原料的选择提供参考。通过上述实验,证实了绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃3种植物提取物具有抑制黑素瘤细胞黑色素合成的作用,其作用机理可能在于:①可以直接抑制黑素瘤细胞内的酪氨酸酶的蛋白表达。②对酪氨酸酶活性的抑制和强抗氧化能力也对阻断黑色素合成具有重要作用。另外本实验还证实,无细胞系统蘑菇酪氨酸酶抑制试验适于美白植物提取物的筛选,而黑素瘤细胞黑色素合成的抑制实验能更准确地判定美白植物提取物的功效和机理。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 前言
• 1.1 天然酪氨酸酶抑制剂的研究进展
• 1.1.1 竞争性天然酪氨酸酶抑制剂
• 1.1.2 非竞争性天然酪氨酸酶抑制剂
• 1.1.3 线性混合竞争性天然酪氨酸酶抑制剂
• 1.1.4 其它植物提取物对酪氨酸酶的抑制作用的相关参数
• 1.2 皮肤美白剂功效评价的主要方法
• 1.2.1 细胞水平的功效评价
• 1.2.2 动物试验法
• 1.2.3 人体皮肤试验法
• 1.2.4 细胞生物学培养法
• 1.3 本课题的背景和意义
• 第二部分 美白植物提取物的初步筛选
• 2.1 材料
• 2.2 试剂、耗材与仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 无细胞系蘑菇酪氨酸酶活性抑制实验
• 2.3.2 无细胞系统自由基清除能力的测定
• 2.4 实验结果
• 2.4.1 无细胞系蘑菇酪氨酸酶活性抑制实验
• 2.4.2 无细胞系统自由基清除能力的测定
• 2.4.3 葡萄籽、绿茶、巴西大樱桃提取物活性的功效比较
• 2.5 讨论
• 第三部分 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃提取物对体外培养816 黑素瘤细胞黑色素合成代谢的影响
• 3.1 材料
• 3.2 耗材与仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 三种植物提取物对黑素瘤细胞增殖的影响
• 3.3.2 三种植物提取物对黑素瘤细胞黑色素合成的影响
• 3.3.3 三种植物提取物对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响
• 3.3.4 葡萄籽提取物对黑素瘤细胞酪氨酸酶的蛋白表达的调节作用
• 3.4 实验结果
• 3.4.1 三种植物提取物对黑素瘤细胞增殖的调节作用
• 3.4.2 三种植物提取物对黑素瘤细胞黑素合成的调节作用
• 3.4.3 三种植物提取物对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的调节作用
• 3.4.4 葡萄籽提取物对黑素瘤细胞酪氨酸酶蛋白表达的调节作用
• 3.5 讨论
• 第四部分 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃提取物对体外培养的MRC-5 人胚肺成纤维细胞的抗氧化保护作用
• 4.1 材料
• 4.2 耗材与仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃对H202氧化损伤的MRC-5细胞的保护作用
• 4.3.2 葡萄籽提取物对体外培养的MRC-5细胞内的（ROS）活性氧的清除作用
• 4.4 实验结果
• 4.4.1 MRC-5细胞H202氧化损伤模型的建立
• 4.4.2 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃对H202氧化损伤的MRC-5细胞的保护作用
• 4.4.3 葡萄籽提取物对体外培养的MRC-5 细胞内的（ROS）活性氧的清除作用
• 4.5 讨论
• 第五部分 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃提取物纯化、成分分析及美白化妆品的功效验证
• 5.1 材料
• 5.2 耗材与仪器
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃的HPLC纯化和LC-MS成分分析
• 5.3.2 美白化妆品的功效验证
• 5.4 实验结果
• 5.4.1 绿茶、葡萄籽、巴西大樱桃的HPLC纯化和LC-MS成分分析
• 5.4.2 美白化妆品的功效验证
• 5.5 讨论
• 参考文献
• 论文、参加科研情况说明
• 致谢