小鼠胚胎发育形态观察及CRB3在胚胎和成体中的表达

论文摘要

为了解胚胎连续发育过程中细胞及各器官组织的形态变化,本研究以昆白系小鼠为实验动物,应用石蜡切片制作-HE染色方法对小鼠附植前胚胎在生殖道内时空分布、植入后胚层分化、各系统和器官组织发育进行了详细观察。进一步应用胚胎显微操作、RT-PCR和免疫荧光组织化学技术对极性调控蛋白CRB3在小鼠胚胎发育各个阶段及成鼠主要器官组织内的表达定位规律进行了研究,以探讨CRB3在小鼠胚胎发育及成体组织上皮细胞极性形成中的可能作用。结果如下:1.对小鼠胚胎发育的形态观察显示,附植前胚胎依次经历了受精和卵裂（2-细胞胚、3-细胞胚、4-细胞胚、8-细胞胚、桑葚胚和囊胚阶段）;附植后经过原肠胚基础上的三胚层形成及分化,完成基础体型建立,进一步器官原基形成并逐步发育完全。本研究方法较完善的显示出不同发育阶段鼠胚的形态结构,得到了系统的小鼠胚胎发育图谱,为鼠胚细胞的迁移、胚内各器官相对位置的变化及胚胎发育连续性的研究提供了借鉴。2.在小鼠卵母细胞和附植前胚胎中均存在CRB3 mRNA和蛋白的表达,CRB3阳性信号主要分布于胞质。阳性信号在成熟卵母细胞和受精卵较强,2-细胞胚和4-细胞胚较弱,至8-细胞胚又逐渐增强,随发育进程在桑葚胚和囊胚的表达依次增强。附植后各阶段胚胎也存在较广泛的CRB3蛋白的表达:E4.5d的内细胞团、滋养层细胞、卵黄囊内胚层,E7.5d的绒毛膜、羊膜、滋养层、卵黄囊内胚层、胚胎外胚层,E8.5d的羊膜,E13.5d的半规管上皮、视网膜、晶状体泡、肝组织均有CRB3的阳性信号。成鼠子宫、胃、肾脏、肝脏、小脑、大脑和小肠等组织器官中表达CRB3 mRNA和蛋白,CRB3蛋白在各器官组织内的表达强度依次为肾脏>小肠>胃>子宫>肝脏>骨骼肌>小脑>大脑。CRB3在小鼠胚胎发育及成体器官组织中呈规律性分布,提示CRB3蛋白对于小鼠胚胎极性及器官组织上皮极性的建立和维持具有重要作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 小鼠早期胚胎发育的分子调控研究进展
• 1.1 胚胎基因组激活
• 1.1.1 胚胎基因组激活的分子基础
• 1.2 致密化起始的分子基础
• 1.2.1 致密化相关蛋白质
• 1.2.2 致密化调控机制
• 1.3 囊胚形成的相关分子及调控
• 1.3.1 紧密连接蛋白
• 1.3.2 钠钾三磷酸腺苷激酶
• 1.3.3 钙黏蛋白
• 1.4 结语
• 第二章 小鼠早期胚胎发育期间细胞极性的建立
• 2.1 上皮细胞的极性
• 2.1.1 上皮细胞顶-底端极性结构
• 2.1.2 PAR3/PAR6/aPKC 复合物
• 2.1.3 CRUMBS/PALS1/PATJ 复合物
• 2.1.4 SCRIBBLE/DLG/LGL 复合物
• 2.2 早期胚胎发育极性的建立
• 2.2.1 卵子的细胞极性
• 2.2.2 受精卵卵裂方式
• 2.2.3 4-细胞胚胎卵裂方式与胚胎极性
• 2.2.4 致密化胚胎卵裂方式与胚胎极性
• 2.2.5 囊胚极性特征
• 2.3 结语
• 第三章 小鼠胚胎体内发育组织学观察
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 小鼠附植前胚胎发育时程及形态变化
• 3.2.2 小鼠附植后胚胎发育的组织形态观察
• 3.3 讨论
• 3.3.1 小鼠胚胎发育时序性
• 3.3.2 鼠胚标本制备注意事项
• 3.4 结论
• 第四章 CRB3 在小鼠体内发育各时期胚胎及成体主要组织器官中的表达定位
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 小鼠卵母细胞和早期胚胎中CRB3 m RNA 的表达
• 4.2.2 CRB3 在小鼠卵母细胞和各时期胚胎中的免疫细胞化学定位
• 4.2.3 一周龄雌鼠子宫、胃、肾脏、肝脏、小脑、大脑、小肠组织中CRB3 m RNA 的表达
• 4.2.4 一周龄雌鼠各组织器官中CRB3 的定位
• 4.3 讨论
• 4.3.1 CRB3 在小鼠附植前胚胎发育期间的表达及其功能
• 4.3.2 CRB3 在小鼠附植后胚胎的表达特征
• 4.3.3 成鼠主要组织器官内CRB3 的分布特点
• 4.4 结论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介