白桦脂酸对鼻咽癌细胞系CNE-1增殖，凋亡和Bcl-2表达的影响

论文摘要

目的:恶性肿瘤的治疗仍然是医学的一大难题。目前,对肿瘤治疗的方法有很多,主要有手术治疗,化学治疗和放疗。对于有些不适合行手术治疗的肿瘤,化疗取得了不错的治疗效果。白桦脂酸是一种新近发现的具有广泛抑瘤作用小分子化疗药物。本实验通过研究白桦脂酸对鼻咽癌细胞系CNE-1增殖和凋亡的影响。方法:体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1,加入不同浓度的白桦脂酸（5-160ug/ml） ,作用不同时间（24h,48h,72h）后MTT法计算抑制率。不同浓度白桦脂酸（10,20,40ug/ml）作用CNE-1细胞24小时后,低密度（5×102/空）接种于6孔板,静置培养15天,计算细胞克隆数。10,20,40ug/ml白桦脂酸作用CNE-1细胞72小时后,倒置显微镜和透射电子显微镜下分别观察白桦脂酸作用CNE-1细胞后的形态学变化,流式细胞仪检测其对CNE-1细胞周期和凋亡的影响.提取浓度为20ug/ml和40ug/ml白桦脂酸作用72h后肿瘤细胞的RNA,计算RNA的浓度及纯度,设计并合成bcl-2和内参照β-actin的上游引物和下游引物,以提取的mRNA为模板,按照试剂盒说明在PCR仪中进行RT-PCR反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像仪下显示结果,运用lab work 30.软件分析结果,检测试验组和对照组bcl-2 mRNA表达水平的差异。结果:1.白桦脂酸对CNE-1细胞体外增殖的影响MTT试验显示不同浓度白桦脂酸对CNE-1细胞增殖有抑制作用,抑制效果有时间和剂量依赖趋势,随时间延长和浓度增加,抑制效果逐渐增强。24h,48h和72h的IC50分别为37.46ug/ml, 24.28ug/ml, 21.15ug/ml。细胞集落形成试验显示白桦酯酸处理组克隆形成率与未处理的对照组比较明显减少（p<0.01）.流式细胞术结果显示白桦脂酸作用后的CNE-1细胞出现G0/G1期的阻滞,而且阻滞程度随作用药物浓度增加而明显, 10,20,40ug/ml白桦脂酸处理组与空白对照组比较G0/G1期比例分别为59.21%,72.20%,77.13% vs 42.94%2.白桦脂酸对CNE-1细胞凋亡的影响白桦脂酸作用CNE-1细胞72小时后,发现细胞变圆,胞浆内溶酶体增多,线粒体肿胀,胞核皱缩,凋亡小体形成等典型的凋亡形态学变化;10,20,40ug/ml白桦脂酸处理CNE-1细胞72h后与空白组比较凋亡比例分别为（13.95%,14.71%,21.99% vs 4.02%, P<0.05）;RT-PCR显示白桦脂酸能够下调抑凋亡基因bcl-2的表达。结论:白桦脂酸在体外能够抑制鼻咽癌细胞系CNE-1的增殖,且抑制效果呈时间和剂量依赖性。其抑制鼻咽癌细胞CNE-1的增殖可能主要通过周期阻滞和诱导细胞凋亡介导。而且白桦脂酸具有诱导CNE-1凋亡的作用,其诱导细胞凋亡与下调抑凋亡Bcl-2表达有关。

论文目录

• 前言
• 摘要
• ABSTRACT
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢