首页> 正文

酱油添加酵母耐盐基因HOG1的研究

2020-12-11阅读(649)

酱油添加酵母耐盐基因HOG1的研究

论文摘要

酱油中的主要风味物质大都是由发酵过程中添加的酵母产生,但是在酱油高盐稀态发酵中盐的浓度高达17%,致使酵母的代谢活性明显降低,这严重影响风味物质的形成,导致酱油质量下降。因此,本实验室应用基因组重排技术,以野生型T酵母为出发菌株构建了耐盐的优良酵母菌株T3-5。此外,因为目前对T酵母的基因组序列处于未知状态,而且对于T酵母和T3-5耐盐机制还不清楚。所以本文对T酵母（Torulopsis versatilis）和T3-5的耐盐基因HOG1进行研究,即在基因转录水平、基因的过量表达、DNA序列及蛋白质结构等分子水平上进行多角度的分析及比对,从而为阐明T酵母的耐盐机制奠定良好基础。本文通过半定量PCR（RT-PCR）对T酵母和T3-5在不同盐浓度下耐盐基因HOG1的RNA表达量进行了分析,研究发现,T3-5的HOG1表达量明显高于T酵母；继而对T酵母和T3-5的HOG1进行克隆测序,即分别将其PCR产物插入到测序载体pUC19中,构建质粒pUC19-T和pUC19-T5,测序结果发现T3-5的HOG1的碱基发生了突变；而后将测序结果翻译成氨基酸,并经NCBI比对,整理拼接后进行蛋白质的二级、三级结构预测,分析发现T和T3-5之间有两个明显的氨基酸差异,同时T3-5的蛋白等电点高于T酵母；最后,分别将T酵母和T3-5的HOG1目的基因片段插入到YEp195表达载体中,随后将所构建的质粒YEp195-T和YEp195-T3-5分别转入酿酒酵母实验室菌株W303-1A中,并对所构建的工程菌株进行耐盐度及其他指标分析,研究发现,菌株W-Y-T5的耐盐性强于W-Y-T,同时又都明显强于对照菌株W-Y。通过本文的研究表明：HOG1基因同样是T酵母渗透压调节机制中的关键基因；T3-5的HOG1基因转录水平增强是导致其耐盐性提高的一个重要原因。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 1 前言
  • 1.1 酱油发酵
  • 1.1.1 高盐稀态发酵工艺
  • 1.1.2 低盐固态发酵工艺
  • 1.1.3 固稀结合发酵工艺
  • 1.2 酱油生产现状
  • 1.2.1 国际酱油生产现状
  • 1.2.2 国内酱油生产现状
  • 1.3 提高酱油质量的方法
  • 1.3.1 固定化技术
  • 1.3.2 添加酶制剂
  • 1.3.3 改造米曲霉
  • 1.3.4 添加产香酵母
  • 1.3.5 构建耐盐酵母
  • 1.4 耐盐机制的理论基础
  • 1.4.1 渗透休克反应
  • 1.4.2 甘油代谢和水甘油通道蛋白
  • 1.4.3 高渗透性甘油（HOG）的信号系统
  • 1.4.4 转录反应
  • 1.4.5 信号控制的研究
  • 1.5 分子生物学及生物信息学
  • 1.5.1 分子生物学的研究方法
  • 1.5.2 生物信息学
  • 1.6 本论文研究的目的、意义和主要内容
  • 2 材料与方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 菌株与质粒
  • 2.1.2 酶与试剂
  • 2.1.3 仪器及设备
  • 2.1.4 溶液与培养基
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 引物设计
  • 2.2.2 RNA提取及反转录
  • 2.2.3 酵母DNA的提取
  • 2.2.4 测序质粒的构建
  • 2.2.5 重组质粒pUC19-T-HOG1和pUC19-T3-5-HOG1的鉴定
  • 2.2.6 测序结果与二、三级结构分析
  • 2.2.7 表达质粒的构建
  • 2.2.8 重组质粒YEp195-T-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1转化至酵母W303-1A中
  • 2.2.9 酵母阳性克隆菌株的鉴定
  • 2.2.10 菌株WYTHOG1和WY5HOG1的比较
  • 3 结果与讨论
  • 3.1 HOG1基因的RNA表达量
  • 3.1.1 RNA提取
  • 3.1.2 反转录及半定量PCR
  • 3.2 HOG1的测序
  • 3.2.1 酵母DNA的提取
  • 3.2.2 HOG1的PCR产物制备
  • 3.2.3 PCR产物的纯化浓缩
  • 3.2.4 产物与pUC19的双酶切
  • 3.2.5 产物与pUC19的连接与转化
  • 3.2.6 克隆子的提取与鉴定
  • 3.3 测序结果与结构分析
  • 3.3.1 基因测序结果分析
  • 3.3.2 Hog1p蛋白氨基酸序列分析
  • 3.3.3 Hog1p蛋白二、三级结构分析
  • 3.4 酵母工程菌株的构建
  • 3.4.1 质粒YEp195-T-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1的构建
  • 3.4.2 重组质粒YEp195-T3-5-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1的鉴定
  • 3.4.3 重组质粒和空白质粒分别转化至酵母W303-1A
  • 3.4.4 酵母工程菌株的鉴定
  • 3.5 过量表达Hog1p蛋白
  • 3.5.1 细胞形态变化
  • 3.5.2 耐盐性生长曲线变化
  • 3.5.3 抗性变化
  • 3.5.4 甘油产量变化
  • 3.5.5 Hog1p的表达
  • 4 结论
  • 5 展望
  • 6 参考文献
  • 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
  • 8 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].酵母壁多糖的生物学功能及其对反刍动物的影响[J]. 饲料工业 2020(05)
    • [2].高耐受酿酒酵母的筛选及酵母曲制备工艺的优化[J]. 酿酒科技 2020(02)
    • [3].解脂酵母利用木糖研究进展[J]. 山东工业技术 2020(01)
    • [4].高酸度水果果酒酿造产酯酵母的鉴定及发酵特性研究[J]. 中国酿造 2020(04)
    • [5].产酯酵母及其产酯关键酶的研究进展[J]. 食品与发酵工业 2020(14)
    • [6].酵母成替抗新风向!这家企业专研酵母11年,第一季度销量逆势增长20%[J]. 当代水产 2020(07)
    • [7].饮料中霉菌和酵母计数检验结果不确定度的评定[J]. 食品安全导刊 2020(18)
    • [8].酵母扩培工艺的变革[J]. 中外酒业·啤酒科技 2020(05)
    • [9].发挥政府引导基金“酵母”作用[J]. 中国财政 2020(10)
    • [10].增加零代酵母扩培收量方法研究[J]. 中外酒业·啤酒科技 2017(21)
    • [11].如何验证酵母是活的[J]. 生物学通报 2018(07)
    • [12].浅析葡萄酒相关酵母[J]. 现代农业 2017(01)
    • [13].优化酵母数的检测方法[J]. 中外酒业·啤酒科技 2017(09)
    • [14].发酵生产燃料乙醇过程中野生酵母的污染和控制[J]. 当代化工 2015(08)
    • [15].硫胺素对鲁氏接合酵母高盐适应性的影响[J]. 中国酿造 2020(11)
    • [16].昌黎产区产酶酵母多样性及其应用潜力分析[J]. 食品与发酵工业 2020(05)
    • [17].白酒酒醅高产酯酵母筛选鉴定及其发酵性能研究[J]. 食品与机械 2020(06)
    • [18].表达透明颤菌血红蛋白对圆红冬孢酵母油脂积累的影响[J]. 可再生能源 2020(09)
    • [19].活酵母对猪大肠体外产甲烷的抑制作用[J]. 中国饲料 2020(18)
    • [20].不同类型酵母杂交促进各类啤酒出现[J]. 中国食品学报 2019(10)
    • [21].阶段控温提高透明质酸酶在毕赤酵母中的表达[J]. 食品与生物技术学报 2016(12)
    • [22].小酵母大能量,这家专注做酵母的企业要上市的了[J]. 当代水产 2017(02)
    • [23].富锌酵母形态与代谢动力学研究进展[J]. 中国药事 2016(04)
    • [24].嗜渗酵母去留各抒己见[J]. 中国蜂业 2014(02)
    • [25].小酵母大用途,酵母在水产生物制剂上的应用[J]. 当代水产 2015(03)
    • [26].酵母魔术师[J]. 创新作文(小学版) 2016(16)
    • [27].酵母的魔力[J]. 科学大众(小学版) 2015(05)
    • [28].豆沙小面包和酵母[J]. 少年科学 2014(04)
    • [29].酵母,人类健康的神奇小伙伴[J]. 中国食品 2008(18)
    • [30].天然酵母中烘焙酵母的分离鉴定与性能优化[J]. 食品与发酵工业 2020(22)

    标签：;  ;  ;  

    酱油添加酵母耐盐基因HOG1的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5