塞来昔布与阿霉素对Raji细胞增殖和凋亡作用及机制的研究

论文摘要

目的:非甾体类抗炎药（nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs）对多种肿瘤如肠癌、乳腺癌、肺癌等具有抗肿瘤作用,研究表明通过环氧化酶（cyclooxygenase,COXs）依赖机制和非COXs依赖机制起作用。本研究通过体外培养人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞株,观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布（Celecoxib）对Raji细胞增殖、凋亡、凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）的表达水平的影响,探讨联合应用阿霉素（adriamycin,ADM）对Raji细胞增殖、凋亡的影响及相关机制。方法:体外培养Raji细胞,分为对照组,塞来昔布组,阿霉素组,塞来昔布+阿霉素组。光镜下观察瑞氏染色后细胞形态变化,应用噻唑蓝（MTT）还原法检测细胞增殖率,用流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡率,逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测caspase-9 mRNA表达,细胞免疫组化法测caspase-9蛋白表达。统计分析采用SPSS13.0软件。所有数据用均数±标准差表示,P＜0.05认为差别有统计学意义。结果:光镜下可见塞来昔布处理的细胞有凋亡改变。单独应用0.1μg/ml阿霉素处理24h细胞的增殖率为（93.41±3.16）%,不同浓度的塞来昔布（20、40、60、80、100μamol/L）处理24h细胞的增殖率分别为（93.56±2.08）%,（86.16±2.27）%,（63.92±3.17）%,（23.21±2.35）%,（18.27±1.36）%;均较对照组降低（P＜0.05）。塞来昔布+阿霉素组细胞24h的增殖率分别为:（80.58±1.95）%,（64.28±1.55）%,（41.62±1.79）%,（12.64±2.45）%,0:与单独应用二药相比明显降低细胞的增殖率（P＜0.05）。流式细胞仪检测显示对照组细胞24h凋亡率为（3.50±1.18）%,应用塞来昔布（20、40、60、80、100μmol/L）24h分别为（5.01±0.80）%,（14.00±1.68）%,（34.33±4.47）%,（57.63±2.27）%,（67.50±2.00%）;除20μmol/L组外,与对照组相比,均有升高（P＜0.05）。0.1μg/ml阿霉素,60μM塞来昔布+0.1μg/ml阿霉素分别作用Raji细胞24h,细胞凋亡率分别为（7.62±1.23）%,（48.07±2.32）%,60μM塞来昔布+0.1μg/ml阿霉素与单独用药相比,凋亡率有升高（P＜0.05）。对照组24h无caspase-9 mRNA表达。塞来昔布组细胞24h后caspase-9 mRNA表达分别为0.13±0.04,0.23±0.02,0.34±0.14,0.48±0.04,0.60±0.01;与对照组相比表达均上调（P＜0.05）。塞来昔布60μM处理Raji细胞48h,72h细胞caspase-9 mRNA表达分别为0.41±0.14,0.51±0.01,和24h相比显著升高（P＜0.05）。0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24hCaspase-9 mRNA表达为0.09±0.03。60μM塞来昔布联合0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24h后,Caspase-9 mRNA表达为0.47±0.02,较单用二药表达升高（P＜0.05）。对照组细胞24h无caspase-9蛋白表达。塞来昔布处理Raji细胞24小时后caspase-9蛋白表达分别为（6.75±1.57）%,（19.00±1.41）%,（26.00±1.41）%（38.50±2.12）%,（52.00±2.83）%,与对照组相比均升高（P＜0.05）。0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24h,Caspase-9蛋白表达为（6.23±1.12）%。60μM塞来昔布联合0.1μg/ml阿霉素作用Raji细胞24b后,Caspase-9蛋白表达为（37.50±3.54）%,高于使用单药（P＜0.05）。结论:1塞来昔布在20μM～100μM浓度范围内,能抑制Raji细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性;2塞来昔布可诱导Raji细胞凋亡,有剂量依赖性,并增强caspase-9的表达;3塞来昔布联合阿霉素能增强对Raji细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写注解
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的科研论文